申请日2016.06.15
公开(公告)日2016.08.24
IPC分类号C12N15/11; C12Q1/68; C12Q1/04
摘要
一种针对膨胀污泥中Haliscomenobacter hydrossis丝状菌群特异性引物和方法，涉及污水生物处理领域。该特异性引物的序列为正向引物(序列为5’‑AGAGTTTGATCCTGGCTC‑3’);反向引物(序列5’‑AGGTATTCCAGCCACACC‑3’)。(2)聚合酶链式反应方法的反应体系：2倍浓度的Taq PreMix试剂10μl;DNA模板0.5‑1μl;正向引物和反向引物(浓度为10μm/L)各0.5‑1μl;加灭菌水到总体积20μl。按上述引物、反应体系进行PCR反应，并将扩增产物在1.5%的琼脂糖凝胶电泳中跑胶，得到分离良好的DNA亮条带(图1)。本发明对H.hydrossis丝状菌群特异性高，能够更高效地进行PCR试验，方便后续对其菌群进行准确定性和定量分析。
权利要求书
1.一种针对膨胀污泥中Haliscomenobacter hydrossis丝状菌群特异性引物，其特征在于：
正向引物序列为5’-AGAGTTTGATCCTGGCTC-3’;
反向引物序列为5’-AGGTATTCCAGCCACACC-3’。
2.包含如权利要求1所述引物的试剂盒。
3.使用如权利要求1所述引物进行PCR扩增的方法，其特征在于：包括变性、复性和延伸。
4.如权利要求3所述方法，其特征在于：
聚合酶链式反应方法的反应体系：
2倍浓度的Taq PreMix试剂10μl;DNA模板0.5-1μl;浓度为10μm/L的正向引物和浓度为10μm/L的反向引物各0.5-1μl;加灭菌水到总体积20μl。
5.如权利要求3所述方法，其特征在于：
聚合酶链式反应的反应程序：
①1个循环：温度为94℃时间为2-5min。
②30个循环：依次为变性温度94℃，时间20-30s;复性温度50-53℃，时间30s-1min;延伸温度72℃，时间2min。
③1个循环：温度72℃，时间5-10min。
说明书
一种针对膨胀污泥中Haliscomenobacter hydrossis丝状菌群特异性引物和方法
技术领域
本发明涉及污水生物处理领域，提供一种针对膨胀污泥中Haliscomenobacter hydrossis(H.hydrossis)丝状菌群特异性引物和方法，与其他引物相比，该引物对H.hydrossis丝状菌群特异性高，能够高效准确地进行H.hydrossis丝状菌群的PCR试验，对后续H.hydrossis丝状菌群进行准确定性和定量分析。
背景技术
目前，活性污泥法污水处理厂及活性污泥法工艺时常发生以H.hydrossis丝状菌群引起的污泥膨胀问题。目前对H.hydrossis丝状菌群的鉴定通常采用较早的Eikelboom丝状菌鉴定方法及荧光原位杂交(FISH)技术。随着聚合酶链式反应(PCR)和实时定量PCR试验技术的发展，给H.hydrossis丝状菌群的鉴定及定量提供了新的技术方法。
然而，目前针对H.hydrossis丝状菌群进行PCR试验的引物稀少，且现有引物的特异性不是很高，在进行PCR过程中同时可以扩增大量非目的菌种，对后续的序列分析带来不便。
因此，目前缺乏针对H.hydrossis丝状菌群的特异性引物和方法，对H.hydrossis丝状菌群进行更高效准确的PCR试验分析，以便后续对H.hydrossis丝状菌群进行准确定性和定量。
发明内容
针对上述研究的不足之处，本发明提供针对H.hydrossis丝状菌群新特异性引物和方法，对H.hydrossis丝状菌群特异性高，能够高效地进行H.hydrossis丝状菌群的PCR试验，方便后续对其定性和定量分析。
1.一种针对膨胀污泥中Haliscomenobacter hydrossis丝状菌群特异性引物，其特征在于：
正向引物序列为5’-AGAGTTTGATCCTGGCTC-3’;
反向引物序列为5’-AGGTATTCCAGCCACACC-3’。
2.包含所述引物的试剂盒。
3.使用所述引物进行PCR扩增的方法，其特征在于：包括变性、复性和延伸。
聚合酶链式反应方法的反应体系：
2倍浓度的Taq PreMix试剂10μl;DNA模板0.5-1μl;浓度为10μm/L的正向引物和浓度为10μm/L的反向引物各0.5-1μl;加灭菌水到总体积20μl。
聚合酶链式反应的反应程序：
①1个循环：温度为94℃时间为2-5min。
②30个循环：依次为变性温度94℃，时间20-30s;复性温度50-53℃，时间30s-1min;延伸温度72℃，时间2min。
③1个循环：温度72℃，时间5-10min。
与现有引物相比，本发明具有以下优点：
(1)本发明提供的H.hydrossis丝状菌群特异性引物和方法能更高效地进行H.hydrossis丝状菌群PCR试验。
(2)本发明提供的H.hydrossis丝状菌群特异性引物可以更准确地进行后续H.hydrossis丝状菌群定性及定量分析。
