申请日2015.07.22
公开(公告)日2016.01.20
IPC分类号G01N33/18
摘要
本方法公开了一种测定含氯消毒废水中大肠杆菌残留的新方法，包括以下步骤：1)先测定水中游离余氯的量。2)根据游离余氯的值初步判定是否有大肠杆菌残留的可能。3)向大肠杆菌有可能残留的水样中加入一定量浓度为0.11g/L的硫代硫酸钠还原游离余氯。4)对水样进行增菌、分离、生化鉴定，符合其特征的报告大肠杆菌检出。本发明的方法简单、易于操作，污染小，准确度高、干扰小。
权利要求书
1.一种测定合氯消毒废水中大肠杆菌残留的新方法，其特征包括如下步骤：
(1)对样品先进行游离余氯的测定;
(2)根据游离余氯的值是否达到临界点来判定是否有大肠杆菌残留;
(3)如果游离余氯的值小于临界点，则向每升水样中加入1mL浓度为0.11g/L的硫代硫酸钠溶液，还原游离余氯;
(4)取水样10mL于10mL双倍乳糖蛋白胨培养液中，平行接种五份，36℃±1℃培养24h ±2h，如未产酸产气则继续培养24h，对产酸产气管划线分离于伊红美蓝琼脂平板， 36℃±1℃培养24h±2h，挑取典型和可疑菌落进行IMViC(用来测定菌的生化特征的4个实验)生化鉴定和革兰氏染色，符合其特征的判定大肠杆菌检出;
(5)大肠杆菌残留的临界点是游离余氯的量为165mg/L，本处的临界点指消毒时间大于 2h，水样中菌落总数≤108cfu/mL;游离余氯的量大于165mg/L时，底定性检测大肠杆菌无残留。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，对每升水样中加入1mL浓度为0.11g/L的硫代硫酸钠溶液还原游离余氯。
说明书
一种测定含氯消毒废水中大肠杆菌残留的新方法
【技术领域】
本发明涉及水质生物检测技术领域，具体涉及测定含氯消毒废水中大肠杆菌残留的新方法。
【背景技术】
大肠杆菌(dachangganjun)(Escherichiacoli)细菌门。细胞杆状，直径约1微米，长约2微米，两端钝圆，周身具鞭毛，可运动。革兰氏染色阴性，不形成芽孢。菌落圆形，白色或黄白色，光滑而具闪光，低平或微凸起，边缘整齐。最适条件下培养20分钟可繁殖 1代。大肠杆菌是人和温血动物肠道内普遍存在的细菌，是粪便中的主要菌种。一般生活在人大肠中并不致病，可能在肠中对合成维生素K起作用。但它侵入人体一些部位时，可引起感染，如腹膜炎、胆囊炎、膀胱炎及腹泻等。人在感染大肠杆菌后的症状为胃痛、呕吐、腹泻和发热。感染可能是致命性的，尤其是对孩子及老人。由大肠杆菌导致的疾病：一是肠道外感染。多为内源性感染，以泌尿系感染为主;二是急性腹泻。某些血清型大肠杆菌能引起人类腹泻。
大肠杆菌(escherichiacoli)一般不致病。但致病性大肠菌株能引起食物中毒。致病性菌株能侵入肠粘膜上皮细胞，具有痢疾杆菌样致病力。已知大肠杆菌有菌体(O)抗原170 种，表面(K)抗原近103种，鞭毛(H)抗原60种，因而构成了许多血清型。在引起人畜肠道疾病的血清型中，有肠致病性大肠杆菌(简称EPEC)、肠毒素性大肠杆菌(简称ETEC) 和肠侵袭性大肠杆菌(间称EIEC)等之分，多数肠毒素性大肠杆菌都带有F抗原。在170 种“O”型抗原血清型中约1/2左右对禽有致病性，但最多的是O1、O2、O78、O35四个血清型。另有产肠毒素大肠杆菌，其肠毒素有耐热性及不耐热性两种，均能使人致病。肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157：H7感染性腹泻是近年来新发现的危害严重的肠道传染病，它除引起腹泻、出血性肠炎外，还可发生溶血性尿毒综合症(HUS)、血栓性小板减少性紫癫(TTP) 等严重的并发症。后者病情凶险，病死率高。
依据《中华人民共和国传染病防治法》和《消毒管理办法》(卫生部第27号令)的相关规定，生活及医疗污水必须经过无害化处理，才可以排放，其中常用的消毒处理方法有：加氯消毒，臭氧法消毒，次氯酸钠法、二氧化氯法消毒等，而这些废水、污水是大肠杆菌很重要的一个污染源，虽然经过消毒，但由于消毒的效果与水中菌液的浓度、作用时间、消毒剂的含量都有着重要的关系，即便是经过消毒的废水，也可能有大肠杆菌的残留，对于这些污水消毒处理的效果，有关单位会定期对其进行监测，对此有很大的检测市场需求，而我国目前的水质检测方法中只有生活饮用水GB5750.12-2006中有大肠杆菌的相关检测，环保部标准HJ/T347-2007《水质粪大肠菌群的测定多管发酵法和滤膜法(试行)》中检测的粪大肠菌群，废水中未发现大肠杆菌的相关检测方法。由于含氯消毒剂有强氧化性，如果参照生活饮用水的检测方法来测定含氯消毒废水中大肠杆菌，会使乳糖胆盐培养液中的指示剂脱色，致使实验无法操作，因此，建立一个准确可行的含氯消毒废水大肠杆菌的测定方法非常必要。
本发明建立了一种检测含氯消毒废水中残留的大肠杆菌新方法，虽然消毒剂对大肠杆菌的消毒效果很好，但由于其浓度、作用时间、菌的浓度都与消毒效果息息相关。本方法采用测定游离余氯的量来初步判定是否有大肠杆菌残留，再对废水中的余氯进行还原来测定大肠杆菌残留。方法简单，易于操作，污染小，准确度高。
【发明内容】
本发明的目的是解决含氯消毒废水中大肠杆菌残留测定的问题，用于检测消毒废水中大肠杆菌的残留，避免大肠杆菌对环境水质的生物污染，本方法成本低，污染小，准确度高，能够满足检测需求。
本发明公开了一种测定含氯消毒废水中大肠杆菌残留的新方法，具体采用下述技术方案：
(1)对样品先进行游离余氯的测定，方法参照GB/T5750.11-2006《生活饮用水标准检验方法消毒剂指标》。
(2)根据游离余氯的值判定是否有大肠杆菌残留可能。当游离余氯的含量小于等于 165mg/L时，大肠杆菌可能残留，需要进一步检测来确证。
(3)如果大肠杆菌有可能残留，向每升水样中加入1mL浓度为0.11g/L的硫代硫酸钠溶液，还原游离余氯。
(4)取水样10mL于10mL双倍乳糖蛋白胨培养液中，平行接种5份，36℃±1℃培养24h ±2h，如未产酸产气则继续培养24h，对产酸产气管划线分离于伊红美蓝琼脂平板， 36℃±1℃培养24h±2h，挑取典型和可疑菌落接种于IMViC(用来测定大肠杆菌的生化特征的4个实验，参见GB4789.38-2012《食品卫生微生物学检验大肠杆菌计数》)进行生化鉴定和革兰氏染色，符合其特征的判定大肠杆菌检出。
(5)当游离余氯的量为165mg/L时是大肠杆菌残留的临界点，本处的临界点指水样的菌落总数为≤108cfu/mL，按《水和废水监测分析方法》(第四版增补版)5.2.4方法操作，消毒时间大于2h。大于此值时，定性检测大肠杆菌无残留。
【具体实施方式】
下面对本发明做进一步详细说明。
实施例1：
分析步骤：取营养肉汤300mL于无菌罐中，制备20罐，121℃灭菌15min，向每个无菌罐中加入一环(接种环)大肠埃希氏菌液，36℃培养24h后，对每个无菌罐进行编号，分别加入10%次氯酸钠溶液，如下表所示：
将所有无菌罐放置2小时(消毒剂作用时间)后分别无菌取2mL用于测定游离余氯的值参照(GB/T5750.11-2006)，同时无菌取10mL于10mL双倍乳糖蛋白胨中，平行接种5份， 36℃培养24h，观察产酸产气情况，未产酸产气者继续培养24h，将产酸产气管挑取一环划线于伊红美蓝琼脂平板上，36℃培养24h，观察有无典型菌落，挑取单个典型和可疑菌落接种于IMViC进行生化鉴定和革兰氏染色，36℃培养24h后观察结果，大肠杆菌的生化特征为靛基质阳性、甲基红试验阳性、乙酰甲基甲醇试验阴性、柠檬酸盐试验阴性。具体结果如下表。
结果分析：当游离余氯的量为165mg/L时是大肠杆菌残留的临界点，本处的临界点指水样的菌落总数为≤108cfu/mL，按《水和废水监测分析方法》(第四版增补版)5.2.4方法操作，消毒时间大于2h。大于此值时，定性检测大肠杆菌无残留。
实施例2：
分析步骤：无菌取经含氯消毒过的生活污水2mL测定游离余氯的值为164mg/L。判定有大肠杆菌残留，向1L水样中加入0.11g/L的硫代硫酸钠溶液1mL，取10mL于双倍乳糖蛋白胨中，同时平行接种5份，36℃培养24h后产酸产气者，挑取一环划线于伊红美蓝平板上， 36℃培养24h，观察有黑色中心，带金属光泽的菌落，挑取5个单菌落接种于IMViC(用来测定大肠杆菌的生化特征的4个实验)进行生化鉴定和革兰氏染色，36℃培养24h后，靛基质阳性、甲基红试验阳性、乙酰甲基甲醇试验阴性、柠檬酸盐试验阴性，革兰氏染色为阴性无芽孢杆菌。符合大肠杆菌的特征，判定水样中大肠杆菌检出。
上述实施例仅供说明本发明之用，而并非是对本发明专利的限制;应当指出的是，对于本领域的普通技术人员，在不脱离本发明构思范围的情况下，还可以作出各种变化和变型，这些都属于本发明的保护范围;因此，凡跟本发明权利要求范围所做的变化与修饰，均应属于本发明权利要求的覆盖范围。
