申请日2011.06.02
公开(公告)日2012.05.09
IPC分类号C12N1/02
摘要
本发明涉及一种分离筛选用于处理生活污水的高效菌株的方法，首先取生活污水制成固体培养基，然后取生活污水的污泥，经梯度稀释后涂布在固体培养基上，待表面水分稍干后倒置放入生化培养箱中培养，在形成的菌落中挑取单菌落到固体培养基平板上划线纯化得到纯菌，最后将纯菌菌苔接种于经灭菌后冷却到室温的生活污水中，放入振荡培养箱中培养，定时取样测定培养液的COD，选出降解速率快、COD去除率高的菌株。该法直接以生活污水加琼脂为固体培养基进行筛选，在平板上生长的均为能分解生活污水中污染物的菌株，避免了对生活污水处理能力优异的菌株流失的问题。
权利要求书 [支持框选翻译]
1.一种用于生活污水高效处理菌株的筛选方法，主要包括如下步骤：
1)筛选用固体培养基的制备：
在需处理的生活污水中加15-20g琼脂，经灭菌处理后分置于培养皿中， 静置冷凝成平板，得到固体培养基平板;
2)原混合菌的采集与稀释：
取生活污水的污泥，用灭菌水按1∶10的比例混合，放入盛有玻璃珠的 容器中，密闭后振荡5-15min，澄清后取上清液进行梯度稀释制得不同稀释 度的混合菌液;
3)混合菌液的涂布：
从各个稀释度的混合菌液中取0.1mL分别加入到制备好的固体培养基 平板上，用灭菌的涂布棒将其均匀涂布，静置使表面水分稍干后倒置放入生 化培养箱中，于30℃培养3-7天;
4)菌株的分离与纯化：
挑选出菌落数为30-150个的平板，把其中不同性状的菌逐一取出，转 移到固体培养基平板上，放入生化培养箱中于30℃培养，使其在培养皿上 最后一区形成一些孤立的菌落，然后把孤立的菌落按照上述方法重复挑选， 即可得到分离纯化后的菌株;
5)菌株降解活性的鉴定：
用接种环将分离纯化后的菌接种到经灭菌处理后冷却到室温的生活污 水中，放入振荡培养箱中于30℃、120r/min下培养24h，定时取样测定培 养液的COD，选出降解速率快、COD去除率高的菌株。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述灭菌处理为在 115-130℃下灭菌10-30min。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤3中每个稀释度 的混合菌液进行三个重复。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤4中使用接种环 把菌取出，并采用分区划线法转移到固体培养基平板上。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤4中孤立的菌落 重复挑选2-3次。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤2中澄清后取上 清液进行梯度稀释，每次稀释10倍，制得稀释倍数为104-108的原混合菌液。
说明书 [支持框选翻译]
用于生活污水高效处理菌株的筛选方法
技术领域
本发明涉及一种处理菌株的方法，尤其是筛选用于生活污水处理的菌株 的方法。
背景技术
随着生活污水处理技术的发展与进步，固定化微生物技术在生活污水处 理中已得到广泛应用，现已成为生活污水处理技术中的主流。该技术所用菌 株的性能对其处理污水的能力和效果有作巨大的影响，然而，目前污水处理 菌株的筛选多是采用LB培养基或在其基础上进行改进的培养基进行筛选。 这些培养基均外加了丰富的营养物质，用这些培养基在进行筛选时，一些对 生活污水处理不具优势的菌株可能成为优势菌而大量、快速地生长繁殖，使 很多生活污水处理性能优异的菌株被抑制或被淹没，从而流失以至筛选失 败。
发明内容
本发明的目的是为了解决目前生活污水处理工程菌的筛选方法会使很 多对生活污水处理能力优异的菌株流失的问题，而提供的一种生活污水处理 工程菌菌株的筛选方法，直接采用生活污水配制培养基及从生活污水排放地 取样分离筛选优势菌种。该方法按如下步骤进行：
1)筛选用固体培养基的制备：
在需处理的生活污水中加15-20g琼脂，经灭菌处理后分置于培养皿中， 静置冷凝成平板，得到固体培养基平板;
2)原混合菌的采集与稀释：
取生活污水的污泥，用灭菌水按1∶10的比例混合，放入盛有玻璃珠的 容器中，密闭后振荡5-15min，澄清后取上清液进行梯度稀释制得不同稀释 度的混合菌液;
3)混合菌液的涂布：
从各个稀释度的混合菌液中取0.1mL分别加入到制备好的固体培养基 平板上，用灭菌的涂布棒将其均匀涂布，静置使表面水分稍干后倒置放入生 化培养箱中，于30℃培养3-7天;
4)菌株的分离与纯化：
挑选出菌落数为30-150个的平板，把其中不同性状的菌逐一取出，转 移到固体培养基平板上，放入生化培养箱中于30℃培养，使其在培养皿上 最后一区形成一些孤立的菌落，然后把孤立的菌落按照上述方法重复挑选， 即可得到分离纯化后的菌株;
5)菌株降解活性的鉴定：
用接种环将分离纯化后的菌接种到经灭菌处理后冷却到室温的生活污 水中，放入振荡培养箱中于30℃、120r/min下培养24h，定时取样测定培 养液的化学耗氧量(COD)，选出降解速率快、COD去除率高的菌株。
进一步的，所述灭菌处理为在115-130℃下灭菌10-30min。
其中步骤2中澄清后取上清液进行梯度稀释，优选每次稀释10倍，制 得稀释倍数为104-108的原混合菌液;步骤3中将每个稀释度的混合菌液进 行三个重复。
另外，更具体的情况为，步骤4中使用接种环把菌取出，并采用分区划 线法转移到固体培养基平板上。
本发明采用的更具体的步骤如下：
1、固体培养基的制备：取所需处理的生活污水1000mL，加15-20g琼 脂，经115-130℃灭菌10-30min，然后分置于培养皿中，静置冷凝成平板， 得到固体培养基平板。
2、原混合菌的采集与稀释：从生活污水的排水沟取污泥，然后用灭菌 水按1∶10的比例混合，放入盛有玻璃珠的容器中，密闭后振荡5-15min， 澄清后取上清液进行梯度稀释制得不同稀释度的混合菌液。
3、混合菌液的涂布：从各个稀释度的混合菌液中取0.1mL分别加入到 制备好的固体培养基平板上，用灭菌的涂布棒将其均匀涂布，静置使表面水 分稍干后倒置放入生化培养箱中于30℃培养3-7天)每个稀释度三个重复)。
4、菌株的分离与纯化：挑选出菌落数为30-150个的平板，并用接种环 把其中不同性状的菌逐一取出并用分区划线法转移到固体培养基平板上，放 入生化培养箱中于30℃培养，使其在培养皿上最后一区形成一些孤立的菌 落，然后把孤立的菌落按照上述方法再挑一次，反复2-3次，即可得到分离 纯化后的菌株。
5、菌株降解活性的鉴定：用接种环将分离纯化获得的菌接种到经 115-130℃灭菌10-30min后冷却到室温的生活污水中，放入振荡培养箱中 于30℃、120r/min下培养24h，每4h取样测定培养液的COD，选出降解 速率快、COD去除率高的菌株。
本发明通过直接以生活污水加琼脂为固体培养基进行筛选，在平板上生 长的均为能分解生活污水中污染物的菌株，与现有方法相比，具有简便，获 得的优良菌株多，分离效果好的特点，避免了对生活污水处理能力优异的菌 株流失的问题。
