申请日2009.01.16
公开(公告)日2009.07.08
IPC分类号G01N33/18
摘要
本发明公开了高盐工业废水BOD的快速测量方法，取10克高盐废水排污口污泥，加入90mL无菌生理盐水，在牛肉膏蛋白胨培养基平板划线分离，37℃培养2d，直至获得纯的耐盐菌菌株;将菌株接种到牛肉膏蛋白胨培养基中，恒温振荡箱中振荡培养24h，4500r/min离心5min，0.9%的NaCl溶液洗涤得耐盐菌;将5mg碳纳米管分散在水中形成5mg·mL-1的碳纳米管悬液;耐盐菌以磷酸盐缓冲液配成0.2g·mL-1菌悬液;菌悬液以体积比1∶2与碳纳米管悬液混合，30μL的混合液均匀涂布于孔径为0.2μ的纤维素薄膜上，凉置至半干，固定于溶氧电极上形成BOD电极;将溶解氧分析仪设置为自动测量，以雷磁数据采集软件即时记录输出电流。本发明的测量方法简单快速，准确度高，稳定性好。
权利要求书
1.高盐工业废水BOD的快速测量方法，其特征在于该测量方法包 括以下步骤：(1)耐盐菌筛选：取10克高盐废水排污口附近的污泥 置于250mL锥形瓶中，加入90mL无菌生理盐水，混匀，在牛肉膏-蛋 白胨培养基平板划线分离，37℃培养2d，挑取单菌落，镜检，直至 获得纯的耐盐菌菌株;
(2)耐盐菌的培养：在无菌操作条件下，将菌株接一环接种到 100mL牛肉膏蛋白胨液体培养基250mL锥形瓶中，用4～6层纱布盖 住瓶口，放在温度为37℃、转速为150r/min的恒温振荡箱中振荡培 养24h，4500r/min离心5min，用质量浓度0.9%的NaCl溶液洗涤两 次，得耐盐菌;其中，耐盐菌为假单胞菌科黄单胞菌;其中，100ml 牛肉膏蛋白胨液体培养基由0.1mol·L-1、pH7.20的磷酸盐缓冲液中 添加牛肉膏0.3g、蛋白胨1g、NaCl 10g、琼脂2g制得;其中， 100mL0.1mol·L-1、pH7.2磷酸盐缓冲液：由72mL0.1moL·L-1Na2HPO4 和28mL0.1moL·L-1KH2PO4配制;
(3)BOD电极制作：用超声分散的方法将5mg碳纳米管分散在 1mL水中形成5mg·mL-1的碳纳米管悬液;称取0.2g耐盐菌，以磷 酸盐缓冲液配制成0.2g·mL-1菌悬液;菌悬液以体积比1：2与碳纳 米管悬液充分混合，30μL的混合液均匀涂布于孔径为0.2μ的纤维 素薄膜上，凉置至半干，固定于溶氧电极上形成BOD电极;其中，短 壁多层碳纳米管为直径30-50mm、长<60mm、纯度>95%的碳纳米管;
(4)BOD测量：将溶解氧分析仪数据采集设置为自动测量，采样 间隔设置为5s;以磷酸盐缓冲液为空白液;恒温(30±1℃);恒速 搅拌以维持测量池中溶解氧饱和;以雷磁数据采集软件即时记录输出 电流。
说明书
高盐工业废水BOD的快速测定方法
技术领域
本发明涉及BOD的测量方法，具体涉及高盐工业废水BOD的快速 测量方法。
背景技术
生化需氧量(BOD)是指在有溶解氧的条件下，好氧微生物在氧化 分解单位体积水中有机物的生物化学氧化过程中所消耗的溶解氧量。 BOD检测常采用五日工作法(BOD5)或七日工作法(BOD7)，五日工 作法是在20℃、氧充足、不搅动条件下，以5日作为测定BOD的标 准时间，所获得的耗氧值。五日工作法耗时、繁琐，对操作人员的技 能要求也比较高;对于应急检测，不能及时提供数据;此外，工业废 水，特别是高盐工业废水，非常不利于微生物生长繁殖，因此高盐工 业废水的BOD检测一直是个难题。
自1977年Karube等首次成功地研制了BOD微生物传感器以来， 因测量快、操作简便、仪器体积小、易携带和检测费用低等优势，微 生物膜型BOD检测电极发展非常快，但大多数也仅适用于日常废水分 析，不能适应高盐厂区废水的BOD检测。来自化工厂和制药厂的废 水，特别是拥有盐析工序的企业，通常含盐量高达3%，甚至高于10%。 因为普通微生物难以适应高盐、有毒环境，所以高盐厂区废水的BOD 检测难以获得准确的实验结果。Riedel等和Lehmann等利用Arxula adeniniorans LS3构建可用于高盐水体BOD检测的电极，Chan等报 道耐渗透压的酵母菌可用于BOD的快速测定，但是均未见上述电极对 高盐厂区废水BOD分析的应用报道。
固定材料及固定方法的选择对微生物传感器的稳定性有很大影 响。从早期的纤维素膜和海藻酸钠已逐渐发展到生物相容性更好的 聚乙烯醇、一些接枝共聚物，以及溶胶-凝胶衍生材料。但溶胶-凝胶 膜易开裂和接枝共聚物易溶胀性等缺点制约了此类材料的使用。碳纳 米管具有良好的生物亲和性，并且具有优秀的物理刚性、化学惰性、 较高的光、热稳定性及可忽略的溶胀性，因此特别适合于构建修饰电 极。
发明内容
本发明的目的在于：提供一种高盐工业废水BOD的快速测量方法， 该测量方法用于高盐工业废水BOD的测量，测量方法简单快速，准确 度高，稳定性好。
本发明的技术解决方案是该测量方法包括以下步骤：(1)耐盐菌 筛选：取10克高盐废水排污口附近的污泥置于250mL锥形瓶中，加入 90mL无菌生理盐水，混匀，在牛肉膏-蛋白胨培养基平板划线分离， 37℃培养2d，挑取单菌落，镜检，直至获得纯的耐盐菌菌株;
(2)耐盐菌的培养：在无菌操作条件下，将菌株接一环接种到 100mL牛肉膏蛋白胨液体培养基250mL锥形瓶中，用4～6层纱布盖 住瓶口，放在温度为37℃、转速为150r/min的恒温振荡箱中振荡培 养24h，4500r/min离心5min，用质量浓度0.9%的NaCl溶液洗涤两 次，得耐盐菌;其中，耐盐菌为假单胞菌科黄单胞菌;其中，100ml 牛肉膏蛋白胨液体培养基由0.1mol·L-1、pH7.20的磷酸盐缓冲液中 添加牛肉膏0.3g、蛋白胨1g、NaCl 10g、琼脂2g制得;其中， 100mL0.1mol·L-1、pH7.2磷酸盐缓冲液：由72mL 0.1moL·L-1Na2HPO4 和28mL 0.1moL·L-1KH2PO4配制;
(3)BOD电极制作：用超声分散的方法将5mg碳纳米管分散在 1mL水中形成5mg·mL-1的碳纳米管悬液;称取0.2g耐盐菌，以磷 酸盐缓冲液配制成0.2g·mL-1菌悬液;菌悬液以体积比1：2与碳纳 米管悬液充分混合，30μL的混合液均匀涂布于孔径为0.2μ的纤维 素薄膜上，凉置至半干，固定于溶氧电极上形成BOD电极;其中，短 壁多层碳纳米管为直径30-50mm、长<60mm、纯度>95%的碳纳米管;
(4)BOD测量：将溶解氧分析仪数据采集设置为自动测量，采样 间隔设置为5s;以磷酸盐缓冲液为空白液;恒温(30±1℃);恒速 搅拌以维持测量池中溶解氧饱和;以雷磁数据采集软件即时记录输出 电流。
本发明的测量方法适用高盐、高BOD的废水环境，测量方法简单 快速，准确度高，稳定性好，满足高盐废水BOD测量要求。
