申请日2014.07.09
公开(公告)日2014.12.03
IPC分类号C12P7/62; C02F3/34; C02F3/12
摘要
嗜盐混合菌群连续处理糖蜜酒精废水生产PHA的方法，属于PHA的生产技术领域。包括以下步骤：嗜盐混合污泥活化培养成嗜盐活性污泥、SBR反应器内以糖蜜酒精废水进行嗜盐混合菌群富集培养、连续流反应器内以糖蜜废水进行连续PHA生产、回收排出的剩余污泥中的PHA。利用混合菌群代替纯菌种合成PHA，不需要进行严格的灭菌程序，简化工艺，节约成本;连续流工艺简单，相比较发酵工艺，无需反复更换发酵液，无需反复接种菌泥，连续进水连续出水，各工艺参数趋于恒定值，实现简单，便于自动控制，易于工程操作，PHA产量高，实现了PHA的连续生产，同时也做到了剩余污泥的资源化利用。
权利要求书
1.盐混合菌群在开放条件下连续处理糖蜜酒精废水生产PHA的方法，其特 征在于，采用的装置为污水处理领域连续推流工艺反应器、鼓风曝气装置、SBR 反应器，利用上述的装置驯化培养嗜盐混合菌群，下实现PHA的连续生产，主 要包括以下步骤：
步骤1，取入河口嗜盐污泥投入到SBR反应器中，以生活污水加粗盐配制培 养液，筛选活化出嗜盐活性污泥，完全好氧曝气运行，溶解氧浓度≥3mg/L，曝 气时间6-10h，沉淀2-6h，然后排掉上清液，运行30-50天;待污泥颜色由黑 棕色转至浅黄色，出现活性污泥特性时，进入下一阶段的驯化培养;
步骤2，向盛有步骤1已驯化出的嗜盐活性污泥的SBR反应器中加入糖蜜酒 精废水，控制反应条件为温度室温，溶解氧≥3mg/L，曝气时间20-23h，沉淀 1-4h，然后排掉上清液;运行20-30天，直至SBR内的嗜盐活性污泥浓度达到 3500mg/L以上，再进入下一阶段的驯化培养;
步骤3，将步骤2的SBR反应器富集的嗜盐活性污泥全部转到连续流反应器 中，启动连续流工艺装置，连续处理盐度范围在40-100g/L的糖蜜酒精废水， 连续流的工艺参数为：水力停留时间12-20h，有机负荷为0.75-1.25 kgCOD/(kgMLSS d)，曝气池溶解氧浓度≥3mg/L，污泥停留时间4-6d，污泥回流 比为200-300%，运行温度为室温，二沉池沉淀时间3-5h;
步骤4，连续运行步骤3连续推流工艺30-40d后，对每日从二沉池排出的 剩余污泥进行PHA的提取和生产。
2.按照权利要求1的方法，其特征在于，连续运行步骤3连续推流工艺 30-40d后，系统对糖蜜酒精废水的COD去除率可以达到75%以上，糖蜜酒精废 水转化成PHA的转化率为0.46-0.8g PHA/g COD，连续运行生产的PHA为共 聚物PHBV。PHA的含量达到约菌体干重的35%以上。
3.按照权利要求1的方法，其特征在于，步骤1中生活污水加粗盐配制培 养液，其盐度为50g/L。
说明书
嗜盐混合菌连续处理糖蜜酒精废水生产PHA的方法
技术领域
本发明属于PHA的生产技术领域，涉及一种利用嗜盐混合菌群在连续推流反应器中处理糖蜜酒精废水合成聚羟基脂肪酸酯(PHA)的技术方法。该发明特别适用于糖蜜酒精废水的预处理进行资源回收，具有废物利用、资源回收和降低PHA工业生产成本的多重优势。
背景技术
目前，全球范围内，PHA的工业化生产普遍采用纯菌单底物进行生物发酵的方法。例如，美国Metabolix公司创造了基因重组的Escherichia coli K12菌株，以葡萄糖为底物进行发酵，24h可获得90%细胞干重的PHA产品生产。德国Biomer公司利用Alcaligenes latus菌株，以蔗糖为底物发酵进行PHA的工业生产。中国清华大学与广东江门生物技术开发中心有限公司、韩国科技院(韩国)和宝洁公司(USA)合作，已成功进行了Aeromonas hydrophila发酵合成PHA的工业生产。但是间歇发酵过程有明显的缺陷：①发酵过程中要不断的向发酵罐中加入酸碱溶液控制pH，要配置专门的投加设备;每个周期结束后发酵罐要进行清洗、消毒;每周期要重新更换发酵液等，使得人力、物力、动力消耗较大;②生产周期较短，由于分批发酵时菌体有一定的生长规律，都要经历延滞期、对数生长期、稳定期和衰亡期，而且每批发酵都要经菌种扩大发酵、设备冲洗、灭菌等阶段;③生产效率低，由于在整个发酵周期中包括放料、洗罐、加料、灭菌等时间，实际有效发酵时间短，发酵效率很低。为此，如果将间歇发酵改为连续生产将克服上述问题，提高PHA生产效率，降低PHA生产成本。
相对于纯菌的PHA生产，混合菌群合成PHA的优势在于：①混合菌群在开放体系内，减少灭菌程序;②特定的工艺条件促使PHA合成菌群更具竞争优势，成为优势菌属，菌群结构相对稳定;③混合菌可以适应多种不同底物，为混合底物应用于生产打下良好基础，并能通过控制底物组成实现对PHA单体组成的控制,扩大了PHA的应用范围。综上，利用混合菌群代替纯菌种合成PHA，简化了工艺操作，降低工艺运行成本，进一步降低PHA生产成本。
在连续流生物技术层面，利用工业废水作为底物在污水生物处理过程中收获PHA是解决在这一问题很好的方式。利用废水尤其是某些工业废水中高含量的有机物作为碳源，在进行废水处理的同时收获PHA，不仅解决了污水处理问题，也使合成PHA过程中底物单一性得到改善，对PHA组分的多样性提供保证。这样的方式一方面突破了现在PHA生产依赖纯菌发酵的现状，另一方面也使污水处理和资源回收有效的结合。因此可以有效地提高生产效率，降低生产成本。
糖蜜酒精产业是我国目前重要的工业产业。该行业产生的废水具有有机含量高、挥发性有机成分高的特性。本发明方法针对糖蜜酒精废水利用嗜盐混合菌群在连续推流反应器内中对有机物废物进行资源回收，实现在开放环境中PHA的连续生产。
发明内容
本发明的目的在于提供一种利用嗜盐混合菌群在连续推流反应器中回收糖蜜酒精废水合成PHA，实现PHA连续生产的方法。该方法可以大大降低PHA工业生产成本，从而使PHA更具市场竞争力，应用更广泛。
嗜盐混合菌群在开放条件下连续处理糖蜜酒精废水生产PHA的方法，其特征在于，采用的装置为公知的污水处理领域连续推流工艺反应器、鼓风曝气装置、SBR反应器，利用上述的装置驯化培养嗜盐混合菌群，下实现PHA的连续生产，主要包括以下步骤：
步骤1，取入河口嗜盐污泥投入到SBR反应器中，以生活污水加粗盐配制培养液，盐度一般优选50g/L，筛选活化出嗜盐活性污泥，完全好氧曝气运行，溶解氧浓度≥3mg/L，曝气时间6-10h，沉淀2-6h，然后排掉上清液，运行30-50天;待污泥颜色由黑棕色转至浅黄色，出现活性污泥特性时，进入下一阶段的驯化培养;
步骤2，向盛有步骤1已驯化出的嗜盐活性污泥的SBR反应器中加入糖蜜酒精废水，控制反应条件为温度室温，溶解氧≥3mg/L，曝气时间20-23h，沉淀1-4h，然后排掉上清液;运行20-30天，直至SBR内的嗜盐活性污泥浓度达到3500mg/L以上，再进入下一阶段的驯化培养;
步骤3，将步骤2的SBR反应器富集的嗜盐活性污泥全部转到连续流反应器中，启动连续流工艺装置，连续处理盐度范围在40-100g/L的糖蜜酒精废水，连续流的工艺参数为：水力停留时间12-20h，有机负荷为0.75-1.25kgCOD/(kgMLSS d)，曝气池溶解氧浓度≥3mg/L，污泥停留时间4-6d，污泥回流比为200-300%，运行温度为室温，二沉池沉淀时间3-5h;
步骤4，连续运行步骤3连续推流工艺30-40d后，对每日从二沉池排出的剩余污泥进行PHA的提取和生产。
连续运行步骤3连续推流工艺30-40d后，系统对糖蜜酒精废水的COD去除率可以达到75%以上，糖蜜酒精废水转化成PHA的转化率为0.46-0.8g PHA/g COD，连续运行生产的PHA为共聚物PHBV。PHA的含量达到约菌体干重的35%以上。
本发明具有以下优点：
(1)本发明中使用嗜盐混合菌，优点在于：①不需要进行严格的灭菌程序，简化工艺，节约成本;②嗜盐微生物胞内积累的PHA在淡水环境很容易通过溶胞释放，便于下游回收 PHA。③嗜盐微生物积累的产物PHA多为特殊的共聚物，其物理性能更适合生产应用，因此应用前景更好。这些优势对进一步降低PHA生产成本，扩大PHA适用范围具有重要的意义。
(2)目前国内的PHA生产主要集中于单底物发酵工艺，使用单底物成本很高，并且合成PHA的组分单一，PHA应用范围较窄。本发明利用工业废水的复杂底物，不仅改善了底物的单一性，同时进行了废水的资源化;
(3)连续流工艺简单，相比较发酵工艺，无需反复更换发酵液，无需反复接种菌泥，连续进水连续出水，各工艺参数趋于恒定值，实现简单，便于自动控制，易于工程操作;
(4)该工艺无需发酵罐冲洗装置、pH调节装置等硬件设备，减少设备成本，同时节约能耗;
(5)连续流工艺的污泥产量高，从二沉池排出的剩余污泥直接用于PHA的提取和生产，PHA产量高，实现了PHA的连续生产，同时也做到了剩余污泥的资源化利用。
