申请日2011.12.14
公开(公告)日2012.07.04
IPC分类号C12N1/20; C12N1/02; C02F101/10; C02F3/02; C12R1/125; C02F3/34
摘要
本发明公开了一种低温下去除污水中磷的枯草芽孢杆菌及分离培养方法，一种低温下去除污水中磷的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)浅黄聚磷CGMCC No.5280，其具有在低温好氧条件下去除污水中磷的能力。实验结果表明：尽管受到低温环境的明显抑制，投加本发明的一种低温下去除污水中磷的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)浅黄聚磷CGMCCNo.5280在低温下，特别是在8-12℃的条件下，对磷去除有明显的强化作用，磷去除率提高了10%，优于一级A的出水标准(水温≤12℃时，一级A标准的控制指标为0.5mg/L)。
权利要求书
1.一种低温下去除污水中磷的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)浅黄聚磷CGMCC No.5280，其具有在低温好氧条件下去除污水中磷的能力。
2.权利要求1的一种去除污水中磷的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)浅黄聚磷CGMCCNo.5280在低温好氧条件下去除污水中磷的用途。
3.根据权利要求2所述的用途，其特征是所述低温为8-12℃。
4.权利要求1的低温下去除污水中磷的枯草芽孢杆菌的的分离培养方法，其特征是包括如下步骤：
(1)将富磷培养液放入小试SBR反应器中，将污水处理厂污泥接种所述富磷培养液中，在8～12℃，连续培养20天，运行周期为6小时，其中包括厌氧搅拌2.5小时，好氧2.5小时，静置0.5小时，排上清液及补充新的富磷培养液共0.5小时;运行期间保持污泥浓度为3000mg/L;
(2)取10mL步骤(1)获得的污泥，加入已装有90mL灭菌蒸馏水和20～30粒灭菌玻璃珠的250mL锥形瓶中，振荡10～30min，使细菌细胞充分释放到上清液中;静置20～40min，取1mL上清液加入装有9mL无菌蒸馏水的试管中，得到10-2的菌悬液，按上述方法依次做系列稀释，一直做到10-8为止;
(3)选取梯度为10-5～10-8的菌悬液，分别取1mL接种于富磷固体培养基，每个稀释度做3个平行样，编号;10℃在有氧的条件下保湿培养2～3周;
(4)从步骤(3)中的富磷固体培养基平板中挑选菌落大，形态不同的单菌落，在富磷固体培养基平板中再次划线分离，重复平板划线分离3-4次，使平板上的菌落在显微镜中的形态相同，单一，大小相似即为单菌落，命名为浅黄聚磷，经鉴定为低温下去除污水中磷的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。
5.根据权利要求4所述的低温下去除污水中磷的枯草芽孢杆菌的的分离培养方法，其特征是所述富磷培养液为由下述组分组成：CH3COONa·3H2O 3.32g、KH2PO4 43.75mg、CaCl2·2H2O25.68mg、KNO3 485.94mg、MgSO4·7H2O 91.26mg、5mL Tris缓冲液和2mL微量元素;加蒸馏水至1000mL，调节pH为7.2;
所述微量元素溶液的组成为：EDTA 5g、FeSO4·7H2O 5g、CuSO4·5H2O 1.6g、MnCl2·4H2O5g、(NH4)6Mo7O2·4H2O 50mg、H3BO3 50mg、KI 10mg和CoCl2·6H2O 50mg加蒸馏水至1000mL。
6.根据权利要求4所述的低温下去除污水中磷的枯草芽孢杆菌的的分离培养方法，其特征是所述富磷固体培养基为由下述组分组成：CH3COONa·3H2O 3.32g、KH2PO4 43.75mg、CaCl2·2H2O 25.68mg、KNO3 485.94mg、MgSO4·7H2O 91.26mg、5mL Tris缓冲液和2mL微量元素，琼脂20g，加蒸馏水至1000mL，调节pH为7.2;
所述微量元素溶液的组成为：EDTA 5g、FeSO4·7H2O 5g、CuSO4·5H2O 1.6g、MnCl2·4H2O 5g、(NH4)6Mo7O2·4H2O 50mg、H3BO3 50mg、KI 10mg和CoCl2·6H2O 50mg加蒸馏水至1000mL。
说明书
低温下去除污水中磷的枯草芽孢杆菌及分离培养方法
技术领域
本发明属于污水处理领域，涉及一株具有低温下去除污水中磷的枯草芽孢杆菌及分离培 养方法。
背景技术
低温对生物处理能力产生重大影响的原因是由于温度的降低影响了微生物的生长及代 谢。聚磷菌虽是低温耐冷菌，但在温度下降过程中，聚磷菌的释磷和吸磷速率也受到影响，， 从而导致污水处理厂冬季出水水质下降。因此亟需一种在低温条件下能强化去除污水中磷的 菌株。
发明内容
本发明的目的是克服现有菌株低温脱磷效果不佳的不足，提供一种去除污水中磷的枯草 芽孢杆菌。
本发明的第二个目的是提供一种去除污水中磷的枯草芽孢杆菌的分离培养方法。
本发明的第三个目的是提供一种去除污水中磷的枯草芽孢杆菌的用途。
一种低温下去除污水中磷的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)浅黄聚磷CGMCC No.5280，其具有在低温好氧条件下去除污水中磷的能力。
一种去除污水中磷的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)浅黄聚磷CGMCC No.5280在 低温好氧条件下去除污水中磷的用途。
低温优选为8-12℃。
低温下去除污水中磷的枯草芽孢杆菌的的分离培养方法，包括如下步骤：
(1)将富磷培养液放入小试SBR反应器中，将污水处理厂污泥接种所述富磷培养液中，在8～ 12℃，连续培养20天，运行周期为6小时，其中包括厌氧搅拌2.5小时，好氧2.5小时，静 置0.5小时，排上清液及补充新的富磷培养液共0.5小时;运行期间保持污泥浓度为3000mg/L;
(2)取10mL步骤(1)获得的污泥，加入已装有90mL灭菌蒸馏水和20～30粒灭菌玻璃 珠的250mL锥形瓶中，振荡10～30min，使细菌细胞充分释放到上清液中;静置20～40min， 取1mL上清液加入装有9mL无菌蒸馏水的试管中，得到10-2的菌悬液，按上述方法依次做 系列稀释，一直做到10-8为止;
(3)选取梯度为10-5～10-8的菌悬液，分别取1mL接种于富磷固体培养基，每个稀释度做3 个平行样，编号;10℃在有氧的条件下保湿培养2～3周;
(4)从步骤(3)中的富磷固体培养基平板中挑选菌落大，形态不同的单菌落，在富磷固体 培养基平板中再次划线分离，重复平板划线分离3-4次，使平板上的菌落在显微镜中的形态 相同，单一，大小相似即为单菌落，命名为浅黄聚磷，经鉴定为低温下去除污水中磷的枯草 芽孢杆菌(Bacillus subtilis)
所述富磷培养液为由下述组分组成：CH3COONa·3H2O 3.32g、KH2PO4 43.75mg、 CaCl2·2H2O 25.68mg、KNO3 485.94mg、MgSO4·7H2O 91.26mg、5mL Tris缓冲液和2mL 微量元素;加蒸馏水至1000mL，调节pH为7.2;
所述微量元素溶液的组成为：EDTA 5g、FeSO4·7H2O 5g、CuSO4·5H2O 1.6g、 MnCl2·4H2O 5g、(NH4)6Mo7O2·4H2O 50mg、H3BO3 50mg、KI 10mg和CoCl2·6H2O 50mg 加蒸馏水至1000mL。
所述富磷固体培养基为由下述组分组成：CH3COONa·3H2O 3.32g、KH2PO4 43.75mg、 CaCl2·2H2O 25.68mg、KNO3 485.94mg、MgSO4·7H2O 91.26mg、5mL Tris缓冲液和2mL 微量元素，琼脂20g，加蒸馏水至1000mL，调节pH为7.2;
所述微量元素溶液的组成为：EDTA 5g、FeSO4·7H2O 5g、CuSO4·5H2O 1.6g、 MnCl2·4H2O 5g、(NH4)6Mo7O2·4H2O 50mg、H3BO3 50mg、KI 10mg和CoCl2·6H2O 50mg 加蒸馏水至1000mL。
实验结果表明：尽管受到低温环境的明显抑制，投加本发明的一种低温下去除污水中磷 的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)浅黄聚磷CGMCC No.5280在低温下，特别是在8-12 ℃的条件下，对磷去除有明显的强化作用，磷去除率提高了10%，优于一级A的出水标准(水 温≤12℃时，一级A标准的控制指标为0.5mg/L)。
