申请日2012.06.05
公开(公告)日2012.09.12
IPC分类号C02F3/34
摘要
本发明公开了一种利用微生物菌群处理含石油废水的方法，是选取芽孢杆菌与肠杆菌先进行培养，分别制得的菌体，洗涤后用生理盐水重新配成OD620nm达到10～12之间的菌悬液，然后将芽孢杆菌与肠杆菌悬液按体积比2～3∶1混合构建人工菌群，再将构建的人工菌群按照体积比6%～8%的接种量接入含石油废水中，实现对含石油废水的处理。实验证明本发明利用微生物菌群处理含石油废水的原油降解率明显高于单一菌株对原油的降解率，为利用人工构建菌群大范围应用于含石油废水的处理提供了基础。
权利要求书
1.一种利用微生物菌群处理含石油废水的方法，步骤是：
(1)选取芽孢杆菌与肠杆菌分别以LB培养基进行斜面培养、一级和二级种子培养， 培养温度28～29℃，培养时间20～36小时;
(2)分别收集步骤(1)制得的菌体，并用生理盐水洗涤2次;之后用生理盐水重新 配成OD620nm达到10～12之间的菌悬液，将芽孢杆菌与肠杆菌悬液按体积比2～3∶1混合， 构建人工菌群;
(3)将步骤(2)构建的人工菌群按照体积比6%～8%的接种量接入每升含石油100克 的废水中，在25～35℃条件下搅拌处理10～12天，检测原油降解率判定处理结果，同时 以含石油废水不加菌悬液同步处理，作为对照;
上述含石油废水以如下配方模拟：
每升蒸馏水含有：KH2PO40.5g，K2HPO44g，NH4Cl 1g，质量百分比为1%的CaCl22ml，质量百分比为10%的MgCl2·6H2O 2ml，质量百分比为1%的FeCl3 200μl，维生素混 合液200μl，离子混合液5ml;
上述的离子混合液的配方为，每升蒸馏水含有：ZnCl2 0.5g;FeCl2 0.5g;MnCl2·4H2O 0.5g;Na2MoO4·2H2O 0.1g;CuCl2·2H2O 0.05g;Na2WO4·2H2O 0.05g;HCl 120mmol/L。
上述的维生素混合液的配方为，每升蒸馏水含有：400mg泛酸钙;200mg肌醇;400 mg尼克酸/烟酸;400mgVB6;200mg对氨基苯甲酸;0.5mgVB12。
2.如权利要求1所述利用微生物菌群处理含石油废水的方法，其特征在于：步骤(2) 所述芽孢杆菌与肠杆菌悬液按体积比3∶1混合。
说明书
一种处理含石油废水的方法
技术领域
本发明涉及一种处理含石油废水的方法，尤其涉及一种利用微生物菌群处理含石油废 水的方法。
背景技术
由于种种原因，在开采运输、炼制和使用石油过程中，不同程度造成对土壤和水资源 的污染。经考察特别是大庆油田石油开发区污染土壤面积超过75%，农业开发区污染面积 超过20%。目前，我国近海海域石油平均浓度已达0.055mg/L。泄漏石油以及炼化过程中 产生的油泥、含油废水等废弃物进入土壤造成土壤生态系统结构与功能的破坏，从而毒害 植物生长，破坏地表植被，造成粮食减产;同时渗透进入地下水，对水体造成严重污染。 石油污染海洋后可以通过食物链在人体内富集对人类健康造成严重危害，同时，石油污染 物进入海洋会对水生生物的生长、发育、繁殖及整个生态系统产生巨大破坏。石油污染使 得渔业资源逐步衰退，造成巨大经济损失。石油污染问题已经成为世界各国普遍关注的问 题。然而现有的对石油污染的物理化学方法，如海上流出油的治理技术:1)油障;2)油船回 收;3)油的吸附材料;4)油处理剂，和陆地流出油处理技术:1)防油堤;2)挡油堤等等，均 不能彻底治理石油污染，并且容易引起二次污染。
微生物修复技术由于其成本低、操作简便、无二次污染、治理彻底等优势越来越受到 各国研究者的重视。目前，国内外已经分离筛选出大量的石油降解菌株，但是由于地理因 素、气候因素、菌株降解底物限制以及石油组分的复杂性等各种因素的影响，单一菌株只 能降解石油组分中的一种或者部分组分，难以达到彻底修复的要求。而混合菌群由于代谢 多样性和降解过程中的协同作用，在石油污染的修复过程中能表现出极大优势，已成为近 年来研究的热点。
发明内容
针对石油污染处理技术的需求，本发明的目的是构建一种人工菌群应用于含石油废水 处理。
本发明所述利用微生物菌群处理含石油废水的方法是：
(1)选取芽孢杆菌与肠杆菌分别以LB培养基进行斜面培养、一级和二级种子培养， 培养温度28～29℃，培养时间20～36小时;
(2)分别收集步骤(1)制得的菌体，并用生理盐水洗涤2次;之后用生理盐水重新 配成OD620nm达到10～12之间的菌悬液，将芽孢杆菌与肠杆菌悬液按体积比2～3∶1混合， 构建人工菌群;
(3)将步骤(2)构建的人工菌群按照体积比6%～8%的接种量接入每升含石油100克 的废水中，在25～35℃条件下搅拌处理10～12天，检测原油降解率判定处理结果，同时 以含石油废水不加菌悬液同步处理，作为对照。
上述含石油废水以如下配方模拟：
每升蒸馏水含有：KH2PO4 0.5g，K2HPO4 4g，NH4Cl 1g，质量百分比为1%的CaCl22ml，质量百分比为10%的MgCl2·6H2O 2ml，质量百分比为1%的FeCl3 200μl，维生素混 合液200μl，离子混合液5ml。121℃条件下灭菌20分钟。
上述的离子混合液的配方为，每升蒸馏水含有：ZnCl2 0.5g;FeCl2 0.5g;MnCl2·4H2O 0.5g;Na2MoO4·2H2O 0.1g;CuCl2·2H2O 0.05g;Na2WO4·2H2O 0.05g;HCl 120mmol/L。
上述的维生素混合液的配方为，每升蒸馏水含有：400mg泛酸钙;200mg肌醇;400 mg尼克酸/烟酸;400mgVB6;200mg对氨基苯甲酸;0.5mgVB12。
上述LB培养基配方是：1升蒸馏水中含：10g蛋白胨，5g酵母粉，10gNaCl，固体 LB培养基在上述配方的基础上加入质量体积比为1.6%的琼脂粉。121℃条件下灭菌20分 钟。
上述利用微生物菌群处理含石油废水的方法中：步骤(2)所述芽孢杆菌与肠杆菌悬 液优选按体积比3∶1混合。
实验证实，本发明利用微生物菌群处理含石油废水(含石油100g/L)的原油降解率 达到85%～89%，而单一菌株对原油降解率仅为10%～64%，显示人工构建菌群降解原油效率 明显高于单一菌株。同时人工构建的菌群可以耐受高浓度原油，在处理高浓度污染的水体 中具有重大应用潜力。
PCR-DGGE实验证明，本发明的人工构建菌群在处理含石油废水过程中各菌株稳定存 活，表明了该人工构建菌群的稳定性，为利用人工构建菌群大范围应用于含石油废水的处 理提供了基础。
