公布日：2022.05.13
申请日：2022.02.16
分类号：C02F3/34(2006.01)I;C12N1/02(2006.01)I;C12N1/20(2006.01)I;C12R1/025(2006.01)N;C12R1/01(2006.01)N;C12R1/38(2006.01)N;C02F101/34(2006.01)N;
C02F101/38(2006.01)N
摘要
本发明提供一种复合菌群处理甲维盐胺化废水的方法。具体步骤为：A、通过海洋、盐湖、盐矿、化工废水及土壤极端环境中提供微生物菌株，并建立化工源菌株库；B、从化工源菌株库中选取备选菌株进行培养，经过多次转接后选取稳定生长的菌种，并按照比例构建复合菌群IMP。本发明提供的复合菌群处理甲维盐胺化废水的方法，解决了甲维盐产生的废水COD高、TN高、毒性大，废水处理难度高的问题，本发明采用生物预处理以替代化学高级氧化，不仅可将COD大部分去除，而且能将有机氮全部氨化，实现废水的高效预处理，为企业活性污泥系统降低处理负担。
权利要求书
1.一种复合菌群处理甲维盐胺化废水的方法，具体步骤为：A、通过海洋、盐湖、盐矿、化工废水及土壤极端环境中提供微生物菌株，并建立化工源菌株库；B、从化工源菌株库中选取备选菌株进行培养，经过多次转接后选取稳定生长的菌种，并按照比例构建复合菌群IMP；C、将甲维盐胺化废水稀释6倍，控制HRT为4d，DO>2mg/L，水温30‑35℃，复合菌群IMP种子液按照30％的接种量接种，通过搅拌系统搅拌，并添加营养物质，菌种处理池pH值控制在6.0‑7.0；D、每天监测废水的基本水质数据，直至废水中TN和COD值不再发生变化；步骤B中建复合菌群IMP的构建方法具体为：a、从化工源菌株库中选取生长周期在3d内、培养温度在25‑35℃、培养基简单的菌株作为备选菌株，并置于无菌96孔板中采用LB培养基活化；b、将甲维盐胺化废水稀释6倍，经0.22μm膜进行过滤除菌后再分装于无菌96孔板内，将活化后的备选菌株按照1％接种于甲维盐胺化废水中，在30℃下培养3d；c、培养结束后，用酶标仪测定96孔板中菌株OD600值，选取OD600＞0.5作为目标菌株，目标菌株经过多次转接后，选取仍能稳定生长的菌种作为待测菌株；d、待测菌株分别用LB培养基进行活化，将处于对数期的新鲜菌液在6000r/min条件下离心5min获得菌体，用0.9％的生理盐水洗涤2次，再用无菌蒸馏水以重悬菌体，获得OD600＝1.0的种子液，取100mL已调节完营养的甲维盐胺化废水装于250mL锥形瓶中，并将种子液按照10％接种量接种于甲维盐胺化废水中，每个菌株设置3组平行，并设置不加菌株的对照组均置于150r/min、30℃培养，定期检测COD值，并选取处理效果好的菌株；e、对在5d内COD去除率50％以上的菌种进行16SrRNA基因测序，将测序结果提交至EzBioCloud数据库进行序列比对，分离出4株具有高效降解效果的菌种分别为JW3、JW6、JW32和JW45；f、将以上4株菌株种子液按照1:1等体积两两复配，并将不同复配混合液分别按照总接种量10％接种于已调节完营养的甲维盐胺化废水中，各体系均置于150r/min、30℃培养，定期检测COD值，通过不同复配组合对甲维盐胺化废水的处理效果，选取复合菌群IMP组成为菌种JW3、JW6和JW32，且比例为1:1:1；所述JW3为Idiomarinaloihiensis，所述JW6为Methylophagaalcalica，所述JW32为Pseudomonasgeniculata，所述JW45为Achromobacterdeleyi。
2.根据权利要求1所述的一种复合菌群处理甲维盐胺化废水的方法，其特征在于，所述LB培养基的成分为酵母粉5g/L、蛋白胨10g/L和NaCl10g/L。
3.根据权利要求1所述的一种复合菌群处理甲维盐胺化废水的方法，步骤C中，稀释6倍的甲维盐胺化废水中补充KH2PO40.5g/L，并采用H2SO4调节废水pH＝6.0‑7.0。
发明内容
本发明提供一种复合菌群处理甲维盐胺化废水的方法，解决了上述的技术问题。
为解决上述技术问题，本发明提供的一种复合菌群处理甲维盐胺化废水的方法，具体步骤为：
A、通过海洋、盐湖、盐矿、化工废水及土壤极端环境中提供微生物菌株，并建立化工源菌株库；
B、从化工源菌株库中选取备选菌株进行培养，经过多次转接后选取稳定生长的菌种，并按照比例构建复合菌群IMP；
C、将甲维盐胺化废水稀释6倍，控制HRT为4d，DO>2mg/L，水温30‑35℃，复合菌群IMP种子液按照30％的接种量接种，通过搅拌系统搅拌，并添加营养物质，菌种处理池pH值控制在6.0‑7.0；
D、每天监测废水的基本水质数据，直至废水中TN和COD值不在发生变化。
进一步地，步骤B中建复合菌群IMP的构建方法具体为：
a、从化工源菌株库中选取生长周期在3d内、培养温度在25‑35℃、培养基简单的菌株作为备选菌株，并置于无菌96孔板中采用LB培养基活化；
b、将甲维盐胺化废水稀释6倍，经0.22μm膜进行过滤除菌后再分装于无菌96孔板内，将活化后的备选菌株按照1％接种于甲维盐胺化废水中，在30℃下培养3d；
c、培养结束后，用酶标仪测定96孔板中菌株OD600值，选取OD600＞0.5作为目标菌株，目标菌株经过多次转接后，选取仍能稳定生长的菌种作为待测菌株；
d、待测菌株分别用LB培养基进行活化，将处于对数期的新鲜菌液在6000r/min条件下离心5min获得菌体，用0.9％的生理盐水洗涤2次，再用无菌蒸馏水以重悬菌体，获得OD600＝1.0的种子液，取100mL已调节完营养的甲维盐胺化废水装于250mL锥形瓶中，并将种子液按照10％接种量接种于甲维盐胺化废水中，每个菌株设置3组平行，并设置不加菌株的对照组均置于150r/min、30℃培养，定期检测COD值，并选取处理效果好的菌株；
e、对在5d内COD去除率50％以上的菌种进行16SrRNA基因测序，将测序结果提交至EzBioCloud数据库进行序列比对，分离出4株具有高效降解效果的菌种分别为JW3、JW6、JW32和JW45；
f、将以上4株菌株种子液按照1:1等体积两两复配，并将不同复配混合液分别按照总接种量10％接种于已调节完营养的甲维盐胺化废水中，各体系均置于150r/min、30℃培养，定期检测COD值，通过不同复配组合对甲维盐胺化废水的处理效果，选取复合菌群IMP组成为菌种JW3、JW6和JW32，且比例为1:1:1。
进一步地，所述LB培养基的成分为酵母粉5g/L、蛋白胨10g/L和NaCl10g/L。
进一步地，步骤C中，稀释6倍的甲维盐胺化废水中补充KH2PO40.5g/L，并采用H2SO4调节废水pH＝6.0‑7.0。
进一步地，所述生化预处理池的底部安装有曝气系统。
与相关技术相比较，本发明提供的复合菌群处理甲维盐胺化废水的方法具有如下有益效果：
本发明提供一种复合菌群处理甲维盐胺化废水的方法，通过复合菌群高效降解效果，解决了甲维盐产生的废水COD高、TN高、毒性大，废水处理难度高的问题，本发明采用生物预处理以替代化学高级氧化，不仅可将COD大部分去除，而且能将有机氮全部氨化，实现废水的高效预处理，为企业活性污泥系统降低处理负担。
（发明人：苏悦;秦彦军;夏雨;李书峰;王伟;李栩琪;孙聪;徐林）
