申请日2010.04.20
公开(公告)日2010.07.28
IPC分类号C12Q1/04
摘要
一种从活性污泥中快速筛选生物破乳菌的方法，它涉及一种筛选生物破乳菌的方法。它解决了现有生物破乳菌破乳效能低，筛选技术滞后，筛选方法针对性差、操作复杂、时间长、筛选效率低的问题。方法：1.富集培养活性污泥中的目的菌，得菌液;2.菌液分离培养得菌株;3.制备全培养液;4.测定排开油圈的直径，取直径d≥3.0cm的菌株;5.制备全培养液;6.向O/W型乳状液中加全培养液进行破乳，选取排油率≥50%的菌株，即完成。本发明将初筛破乳菌时间从大于3个月降低至1个月，筛出率可达到100%，破乳能力高于50%的菌株，进一步驯化培养则可得到破乳能力高于80%的高效菌株，针对性强，操作简单易。
权利要求书
1.一种从活性污泥中快速筛选生物破乳菌的方法，其特征在于从活性污泥中快速筛选生物破乳菌的方法按以下步骤进行：一、向装有150ml液体无机盐培养基的三角瓶中接种活性污泥，在温度为28～30℃、摇床转数为140r/min的条件下培养7d，得富集菌液，然后转接到新鲜的液体无机盐培养基中，在温度为28～30℃、摇床转数为140r/min的条件下培养7d，重复转接3次，得菌液;二、采用蓝胶平板培养基或油平板培养基对菌液进行划线分离培养，培养条件为倒置于28～30℃的生化培养箱中培养48～72h，然后挑取阳性单菌落进行划线纯化培养，直至得到菌落及菌体形态一致的菌株;三、将菌株接种于装有100ml液体无机盐培养基的三角瓶中，在温度为30℃、摇床转数为140r/min的条件下培养3d，得全培养液;四、将0.2ml经过油红O染色的煤油滴加到有30ml蒸馏水且直径为10cm的培养皿中，煤油膜铺开稳定后，再向煤油膜表面滴加20μl全培养液，静止30s后测定排开油圈的直径，选取直径d≥3.0cm的菌株;五、将步骤四中所得菌株接种于装有100ml液体无机盐培养基的三角瓶中，在温度为30℃、摇床转数为140r/min的条件下培养3d，得全培养液;六、向装有5mLO/W型乳状液的磨口具塞比色管中加入2mL步骤五中所得全培养液，震荡后静止，在室温下进行破乳，24h后选取排油率≥50%的菌株，即完成从活性污泥中快速筛选生物破乳菌;其中步骤一中活性污泥按体积比为25%的量接种。
2.根据权利要求1所述的一种从活性污泥中快速筛选生物破乳菌的方法，其特征在于步骤一、步骤三和步骤五中液体无机盐培养基的成分均相同，液体无机盐培养基由4.0g的NH4NO3、4.0g的K2HPO4、6.0g的KH2PO4、0.2g的MgSO4·7H2O、1ml的微量元素溶液、40ml的液体石蜡和1000mL的去离子水中组成，所述的微量元素溶液由1000mg的CaCl2·2H2O、1000mg的FeSO4·7H2O和1400mg的EDTA溶于1000mL的去离子水中组成。
3.根据权利要求1所述的一种从活性污泥中快速筛选生物破乳菌的方法，其特征在于步骤一中活性污泥来自城市污水处理厂曝气池。
4.根据权利要求1所述的一种从活性污泥中快速筛选生物破乳菌的方法，其特征在于步骤二中蓝胶平板培养基由1.0g的牛肉膏、20g的葡萄糖、5g的蛋白胨、0.2g的酵母膏和20g的琼脂粉溶于蒸馏水1000ml中组成。
5.根据权利要求1所述的一种从活性污泥中快速筛选生物破乳菌的方法，其特征在于步骤二中油平板培养基由0.1g的(NH4)2SO4、0.2g的NH4NO3、0.03g的MgSO4、1g的KH2PO4、0.4g的Na2HPO4、0.05g的酵母粉、20g的琼脂粉、浸过液体石蜡的粗滤纸和1000ml的蒸馏水组成。
说明书
一种从活性污泥中快速筛选生物破乳菌的方法
技术领域
本发明涉及一种筛选生物破乳菌的方法。
背景技术
生物破乳剂作为生物制剂的一种，具有破乳效率高、成本低、适应性高、环境友好、可重复使用等优点，具有广泛的研究前景。而高效生物破乳菌的种类与数量直接关系到生物破乳剂的应用范围及破乳效果;目前，已报道的高效生物破乳菌的种数相对较少(生物破乳菌菌种单一)，且破乳效能低(破乳能力低于50%)，导致此现象的原因主要有，破乳菌菌源地的选取不当;筛选技术滞后，筛选方法针对性不强，手段单一;筛菌过程复杂，耗时过长(初筛破乳菌时间大于3个月)，筛选效率低，仅为20%～50%。
发明内容
本发明目的是为了解决现有生物破乳菌破乳效能低，筛选技术滞后，筛选方法针对性差、操作复杂、时间长、筛选效率低的问题，而提供的一种从活性污泥中快速筛选生物破乳菌的方法。
从活性污泥中快速筛选生物破乳菌的方法按以下步骤进行：一、向装有150ml液体无机盐培养基的三角瓶中接种活性污泥，在温度为28～30℃、摇床转数为140r/min的条件下培养7d，得富集菌液，然后转接到新鲜的液体无机盐培养基中，在温度为28～30℃、摇床转数为140r/min的条件下培养7d，重复转接3次，得菌液;二、采用蓝胶平板培养基或油平板培养基对菌液进行划线分离培养，培养条件为倒置于28～30℃的生化培养箱中培养48～72h，然后挑取阳性单菌落进行划线纯化培养，直至得到菌落及菌体形态一致的菌株;三、将菌株接种于装有100ml液体无机盐培养基的三角瓶中，在温度为30℃、摇床转数为140r/min的条件下培养3d，得全培养液;四、将0.2ml经过油红O染色的煤油滴加到有30ml蒸馏水且直径为10cm的培养皿中，煤油膜铺开稳定后，再向煤油膜表面滴加20μl全培养液，静止30s后测定排开油圈的直径，选取直径d≥3.0cm的菌株;五、将步骤四中所得菌株接种于装有100ml液体无机盐培养基的三角瓶中，在温度为30℃、摇床转数为140r/min的条件下培养3d，得全培养液;六、向装有5mLO/W型乳状液的磨口具塞比色管中加入2mL步骤五中所得全培养液，震荡后静止，在室温下进行破乳，24h后选取排油率≥50%的菌株，即完成从活性污泥中快速筛选生物破乳菌;其中步骤一中活性污泥按体积比为25%的量接种。
本发明针对破乳菌的自身特点，提高富集培养的选择性和针对性，将生物表面活性剂产生菌的筛选方法与破乳试验相结合，建立一套高效、简单、周期短的快速筛选系统，用于曝气池活性污泥中具有破乳能力菌株的有效筛选，可得到多种具有高效破乳能力的菌株，对丰富高效破乳菌的菌种资源以及今后大规模生物破乳剂生产所需工程菌的培育均具有深远的意义;利用具有明确目的性的菌株识别方法替代传统的分离纯化手段，将初筛破乳菌时间从大于3个月降低至1个月，极大缩短了冗长的筛菌周期;并保证活性污泥中破乳菌的筛出率可达到100%，明显提高筛菌效率;同时解决了以往所筛出的目的菌株破乳能力低的问题，此方法更容易获得破乳能力高于50%的菌株，进一步驯化培养则可得到破乳能力高于80%的高效菌株;除此以外，该方法还具有针对性强，方法灵活，操作简单易掌握的优点。
