申请日2004.07.30
公开(公告)日2005.03.23
IPC分类号C02F3/34; C12N1/00
摘要
本发明提供一种特效菌剂fhhh的发酵方法和应用，本发明的发酵液体培养基是土豆汁加葡萄糖，价廉易得，发酵参数：发酵温度(T)=30±2℃;pH=7.0;反应器中溶解氧(DO)≥2mg/L;用本发明的方法生产特效菌成本低，生产能力大，不产生新基因，无基因污染问题，可处理对苯二甲酸废水。
权利要求书
1、一种特效菌剂的发酵方法，其特征是发酵工艺参数为：发酵温 度30±2℃;pH值7.0±1，反应器中溶解氧≥2mg/L;培养基 为土豆汁;发酵时间≥24小时，细菌浓度≥2g/L。
2、根据权利要求1所述的方法，其特征是所述土豆汁每100升加 葡萄糖1公斤。
3、根据权利要求1所述的方法，其特征是发酵过程中还可加入有 机硅发酵消泡剂。
4、根据权利要求1所述的特效菌处理化工废水的方法，其特征是 用于降解对苯二甲酸废水。
说明书
特效菌剂的发酵及处理化工废水的方法
技术领域
本发明涉及一种特效微生物菌的发酵方法及应用。
背景技术：
国际上已有多种处理废水特效菌剂，但是没有制备与应用原生质 体融合菌剂处理废水的专利。典型的如日本的EM，又如美国PARADISF 公司的高智能微生物制剂HIMP(High-Intelligence Microorganism Preparation)，24元/1升。由于成本和售价太高，国内厂家一般不 用进口的处理废水特效菌剂，而国内这方面产品目前仍是空白。
由多方共同参与所开发的Fhhh特效菌是通过体内基因重组，将 真核(白腐真菌PC)、原核(PTA废水处理系统中的土著菌YZ1)、真 核(酿酒酵母SC)两界细胞的3株优势菌原生质体，进行跨界融合 构建而成。Fhhh特效菌传代350代以上，具有分子遗传稳定性。集3 亲株的高降解性、高繁殖性、高絮凝性的3高优势。其比降解率是 土著菌的12倍以上，Fhhh特效菌的保藏编号CGMCC No.0783，中国 微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏。
中国专利02138171公开了一种fhhh的发酵方法，发酵培养基 (矿物盐)组成是K2HPO4、KH2PO4、NH4NO3、Na2SO4、MgSO4、MnSO4.4H2O、 Ca2CL2、FeSO4、CH3COONa等。
本发明的发酵方法无需矿物盐，直接以价廉易得的土豆为原料 制备培养基，通过合适的发酵工艺，可大批量生产，成本低廉。
发明内容
本发明目的是提供一种特效菌fhhh的发酵方法及应用 本发明的技术实质：将fhhh特效菌，发酵制备成处理废水的特效菌 剂。
技术构思：以基因工程特效菌Fhhh为出发菌，通过廉价液体培 养基配方的筛选与发酵工艺的控制摸索，生产出低成本、高效的Fhhh 特效菌剂，成本仅为国外的1/4左右，让国内厂家用得起，并配套相 关的应用技术，在国内有持久性。
本发明的实施方案：
将土豆洗净，煮沸至熟而不烂，滤去土豆渣后即为土豆汁，每 1001土豆汁加葡萄糖1公斤，加入反应器中，调节pH至7.0;升温 至121±2℃灭菌20分钟，降温至发酵温度发酵。
发酵温度(T)=30±2℃;pH=7.0±1;反应器中溶解氧(DO) ≥2mg/L;搅拌转速200rpm;发酵时间(t)≥24小时(以观察到有 丝菌球/体产生为止);细菌浓度≥2g/L。
上述发酵工艺中还可以加入消泡剂，消除发酵形成的泡沫。
消泡剂是有机硅发酵消泡剂，如x-1010f、x-1020f、x-1030f、 x-100f(南京四新科技应用研究所商品)
用本发明方法生产的Fhhh特效菌剂的成本低，仅为500元/吨左 右，售价可以远低于进口的菌剂;且可以大批量生产。
Fhhh特效菌剂保持了Fhhh菌所具有的三亲株的三高优势，提高 废水处理效率，节约费用25%以上;
Fhhh特效菌剂既可处理有毒有机废水，也可处理常规有机废水;
具体实施方式：
实施例1、应用fhhh的发酵方法
生物反应器：自动不锈钢发酵罐BIOTECH-300J上海保兴生物 设备工程有限公司，250L，自控参数设定：溶解氧(DO)=2mg/L; PH=7.0;T=30℃;
将土豆洗净，煮沸至熟而不烂，滤去土豆渣后即为土豆汁，每 100ml土豆汁加葡萄糖1公斤，加入发酵罐中，加入消泡剂x-1010f; 升温至121±2℃灭菌20分钟，降温至发酵温度发酵。
搅拌转速：搅拌转速200rpm;
发酵时间(t)=24小时细菌浓度=2g/L。
发酵产物颜色淡黄色，ph值8.6～8.7，吸光度660nm1.200。
Fhhh特效菌制备物的保存配方：
菌剂保存：按照100单位/毫升加入制霉菌素和硫酸琏霉素(抑制其 它细菌生长)，保存温度5℃左右。
实施例2、Fhhh特效菌处理废水的实例
(一)静态培养(30天)：10m3膜生物反应器中投入5m3Fhhh菌剂， 曝气，保持溶解氧大于1mg/l，每天加入COD2000mg/l左右PTA 废水100L，分析反应器中废水COD变化及660nm吸光度，考察 细菌生产情况，保持COD∶N∶P=200∶5∶1。待挂膜有所生长， COD明显下降完成静态培养。
(二)动态驯化(60天)：边进边出，通过循序渐进的方式逐步 提高装置负荷。保持溶解氧大于1mg/l，COD∶N∶P=200∶5∶1， 进水pH7.0左右。水量由最初的50升/小时逐步提升到300升/ 小时，进水COD保持在2600～3000mg/L，TA浓度保持在800- 1000mg/L，pH在7～8之间。装置负荷由0.5KgCOD/M3·D提升 到2.4KgCOD/M3.D。最终保持2.4KgCOD/M3·D左右负荷下的稳 定运行。
经处理后废水TA浓度从800～1000mg/L降解到2～10mg/L， 满足废水排放标准。
本发明的微生物保藏资料：CGMCC No.0783三亲株跨界融合特效 菌，中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏。
