申请日2005.05.16
公开(公告)日2005.11.16
IPC分类号C12Q1/06
摘要
油田水质硫酸盐还原菌的定量检测方法，它涉及油田水系统中常规污水、含聚污水、地面工艺的水处理过程中硫酸盐还原菌(SRB)的培养及厌氧菌的计数。本发明的目的是为了解决现有的油田水质SRB菌检测中，检测周期长、不能全面真实的反映水中的SRB菌的数量、不能即时的指导生产、检测费用较高的问题。本发明选用在同一个稀释梯度下做三至五个平行样，吸取1mL注入备用的培养基中;将MPN的培养基放到摇床上，在38℃、180转/min条件下摇动;结果观察：第四天和第七天分别计数。本发明的方法具有记数更加准确，有效地缩短了计数时间，五管平行法四天可以实现初步计数，七天可以达到准确计数，真实的反应了生产实际情况、降低了检测费用的优点。
权利要求书
1、油田水质硫酸盐还原菌的定量检测方法，该方法是通过以下步骤实 现的：(1)、取样：将油田的水样注入到经灭菌的通有高纯氮气的厌氧管中; (2)、以下操作在超净工作台下完成，紫外线灭菌20～40min，其特征是向 灭菌的硫酸盐还原菌的培养基中加入1mL的质量百分浓度比为6%的 FeSO4·(NH4)2SO4溶液备用;(3)、“厌氧MPN法”：首先选择水样的稀释倍 数，通常大于经验值的二到三个数量级，用倍比稀释法稀释，取水样1mL 注入含9mL无氧水的厌氧管中，最终水样被稀释十倍，依次从该管中用一 次性注射器取样1mL注入下一个用于倍比稀释的厌氧管中，直到选择稀释 的倍数;(4)、选用三管至五管平行法，选用在同一个稀释梯度下做三个至 五个平行样，吸取1mL注入备用的培养基中;(5)、将MPN的培养基放到摇 床上，在38℃、180转/min条件下摇动;(6)、结果观察：第四天和第七天 分别计数。
2、根据权利要求1所述的油田水质硫酸盐还原菌的定量检测方法，其 特征在于硫酸盐还原菌培养基的制备方法如下：一、首先由下列成分按重 量份数制备培养基，K2HPO4：0.2～0.8、NH4CI：0.5～1.5、Na2SO4：5～ 15、CaCI2·2H2O：0.01～0.6、MgSO4·7H2O：1.5～4、酵母膏：4～8、 质量百分浓度比为60%的乳酸钠溶液：5～15、葡萄糖∶0.5～1.5、维生 素C：1～5、蒸馏水：1000～2000，将上述成分混合均匀，然后调pH值=7.8， 制成培养基，再加入培养基总重量0.2%的指示剂刃天青溶液;二、将上述 培养基用灭菌锅煮沸后，向锅内加入培养基总重量0.2～0.8%的L-半光胺 酸盐，盖上锅盖，从锅盖的中间孔中插入医用针头，通入高纯氮气驱氧20～ 30min，指示剂的颜色由紫色逐渐消失后，将另一个医用针头插入到厌氧管 中，通入高纯氮气，将厌氧管中的含氧空气吹走，用10mL的医用注射器从 灭菌锅中吸8mL培养基注入到厌氧管中，将密封后的厌氧管在121℃条件下 灭菌15～30min即可。
3、根据权利要求1所述的油田水质硫酸盐还原菌的定量检测方法，其 特征在于质量百分浓度比为6%的FeSO4·(NH4)2SO4溶液的制备方法如下： 首先制备无氧水，在灭菌锅中加入一升去离子水煮沸后，加入L-半光胺酸 盐0.2～0.8g，盖上灭菌锅的盖，从锅盖的中间孔中插入医用针头，向灭菌 锅内通入高纯氮气驱氧10～30min。配制10mL的6%的FeSO4·(NH4)2 SO4溶 液，将称量好的FeSO4·(NH4)2SO4放入厌氧管中，将另一个医用针头插入厌 氧管中，通入高纯氮气，将厌氧管中的含氧空气吹走，用10mL的医用注射 器从灭菌锅中吸9mL水注入厌氧管中，将密封后的厌氧管在121℃条件下灭 菌15～30min即可。
4、根据权利要求2所述的油田水质硫酸盐还原菌的定量检测方法，其 特征在于硫酸盐还原菌培养基由下列成分按重量份数制备而成：K2HPO4： 0.25、NH4CI：0.6、Na2SO4：6、CaCI2·2H2O：0.02、MgSO4·7H2O：1.6、 酵母膏：4.5、质量百分浓度比为60%的乳酸钠溶液：6、葡萄糖：0.6、 维生素C：1.5、蒸馏水：1050。
5、根据权利要求2所述的油田水质硫酸盐还原菌的定量检测方法，其 特征在于硫酸盐还原菌培养基由下列成分按重量份数制备而成：K2HPO4： 0.75、NH4CI：1.45、Na2SO4：14、CaCI2·2H2O：0.55、MgSO4·7H2O：3.5、 酵母膏：7.5、质量百分浓度比为60%的乳酸钠溶液：14、葡萄糖：1.4、 维生素C：4.5、蒸馏水：1950。
6、根据权利要求2所述的油田水质硫酸盐还原菌的定量检测方法，其 特征在于硫酸盐还原菌培养基由下列成分按重量份数制备而成：K2HPO4： 0.5、NH4CI：1、Na2SO4：10、CaCI2·2H2O：0.1、MgSO4·7H2O：2.5、 酵母膏：6、质量百分浓度比为60%的乳酸钠溶液：10、葡萄糖：1、维 生素C：3、蒸馏水：1000。
说明书
油田水质硫酸盐还原菌的定量检测方法
技术领域：
本发明涉及油田水系统中常规污水 、含聚污水、地面工艺的水处理过 程中硫酸盐还原菌(SRB)的培养及计数。
背景技术：
目前，油田系统内SRB菌的计数主要执行中国石油天然气行业标准，“油 田注入水细菌分析方法——绝迹稀释法”(部颁标准)、SY-TO532-93。上述 的这种方法存在的问题是：检测需要14天的时间，由于检测周期较长，不 能有效的和即时的指导生产实践，在实际操作过程中有些严格的厌氧SRB 菌无法生存，导致SRB菌的记数结果不准确，不能真实的反映生产实际情 况，同时检测费用较高。
发明内容：
本发明的目的是为了解决现有的油田水质SRB菌检测中，检测周期长、 不能真实全面的反应水中的SRB菌的数量、不能即时的指导生产、检测费 用较高的问题，提供一种油田水质硫酸盐还原菌的定量检测方法，本发明 具有记数准确、缩短计数时间、真实的反映生产实际情况、降低检测费用 的特点。本发明的方法是通过以下步骤实现的：1、取样：将油田的水样注 入到经灭菌的含有高纯氮气的厌氧管中;2、以下的步骤在超净工作台下完 成，紫外线灭菌20～40min，向灭菌的硫酸盐还原菌的培养基中加入1mL的 质量百分浓度比为6%的FeSO4·(NH4)2SO4溶液(终浓度为6‰)备用;3、 “厌氧MPN法”，选择水样的稀释倍数：通常大于经验值的二到三个数量级， 用倍比稀释法(MPN)稀释，取水样1mL注入用于倍比稀释的厌氧管中，最 终水样被稀释十倍，依次从该管中用一次性注射器取样1mL注入下一个用 于倍比稀释的厌氧管中，直到选择稀释的倍数;4、选用三管至五管平行法， 选用在同一个稀释梯度下选择做三至五个平行样，吸取1mL注入备用的培 养基中;5、将MPN的培养基放到摇床上，在38℃、180转/min条件下摇动; 6、结果观察：第四天和第七天分别计数。本发明的方法其结果表明，三管 平行法记录的结果在水样低浓度的情况下，最大相差一个数量级，在高浓 度的情况下，相差小于两个数量级。而五管平行法记录的结果置信度大于 95%。五管平行法四天记录的结果与七天记录的结果只在系数上有差别，而 在数量级上无差别。在第七天已经稳定生长，以后无变化。本发明的方法 具有记数更加准确，有效的缩短了计数时间，四天可以实现初步计数，七 天可以达到准确计数，真实的反应了生产实际情况、降低了检测费用的优 点。
具体实施方式：
具体实施方式一：本实施方式的方法是通过以下步骤实现的：1、取样： 将油田的水样注入到经灭菌的含有高纯氮气的厌氧管中;2、以下操作在超 净工作台下完成，紫外线灭菌20～40min，向灭菌的硫酸盐还原菌的培养基 中加入1mL的质量百分浓度比为6%的FeSO4·(NH4)2SO4溶液(终浓度为6 ‰)备用;3、“厌氧MPN法”，选择水样的稀释倍数：通常大于经验值的二 至三个数量级，用倍比稀释法(MPN)稀释，取水样1mL注入用于倍比稀释 的厌氧管中，最终水样被稀释十倍，依次从该管中用一次性注射器取样1mL 注入下一个用于倍比稀释的厌氧管中，直到选择稀释的倍数;4、选用三管 至五管平行法，选用在同一个稀释梯度下做三至五个平行样，吸取1mL注 入备用的硫酸盐还原菌的培养基中;5、将MPN的培养基放到摇床上，在38 ℃、180转/min条件下摇动;6、结果观察：第四天和第七天分别计数。
具体实施方式二：本实施方式的硫酸盐还原菌培养基的制备方法如下： 一、首先由下列成分按重量份数制备培养基，K2HPO4：0.2～0.8、NH4CI： 0.5～1.5、Na2SO4：5～15、CaCI2·2H2O：0.01～0.6、MgSO4·7H2O：1.5～ 4、酵母膏：4～8、质量百分浓度比为60%的乳酸钠溶液：5～15、葡萄糖： 0.5～1.5、维生素C：1～5、蒸馏水：1000～2000，将上述成分混合均匀， 然后调pH值=7.8，制成培养基，再加入培养基总重量0.2%的指示剂刃天青 溶液;二、将上述培养基用灭菌锅煮沸后，向锅内加入培养基总重量0.2～ 0.8%的L-半光胺酸盐，盖上锅盖，从锅盖的中间孔中插入医用针头，通入 高纯氮气驱氧20～30min，指示剂的颜色由紫色逐渐消失后，将另一个医用 针头插入到厌氧管中，通入高纯氮气，将厌氧管中的含氧空气吹走，用10mL 的医用注射器从灭菌锅中吸8mL培养基注入到厌氧管中，将密封后的厌氧 管在121℃条件下灭菌15～30min即可。其它方法和步骤与具体实施方式一 相同。
具体实施方式三：本实施方式的质量百分浓度比为6%的FeSO4·(NH4)2SO4 溶液的制备方法如下：首先制备无氧水，在灭菌锅中加入一升去离子水 煮沸后，加入L-半光胺酸盐0.2～0.8g，盖上灭菌锅的盖，从锅盖的中间 孔中插入医用针头，向灭菌锅内通入高纯氮气驱氧10～30min。配制10mL 的6%的FeSO4·(NH4)2SO4溶液，将称量好的FeSO4·(NH4)2SO4放入厌氧管 中，将另一个医用针头插入厌氧管中，通入高纯氮气，将厌氧管中的含氧 空气吹走，用10mL的医用注射器从灭菌锅中吸10mL水注入厌氧管中，将 密封后的厌氧管在121℃条件下灭菌15～30min即可。其它方法和步骤与具 体实施方式一相同。
具体实施方式四：本实施方式的硫酸盐还原菌培养基由下列成分按重 量份数制备而成：K2HPO4：0.25、NH4CI：0.6、Na2SO4：6、CaCI2·2H2O： 0.02、MgSO4·7H2O：1.6、酵母膏：4.5、质量百分浓度比为60%的乳酸钠 溶液：6、葡萄糖：0.6、维生素C：1.5、蒸馏水：1050。
具体实施方式五：本实施方式的硫酸盐还原菌培养基由下列成分按重 量份数制备而成：K2HPO4：0.75、NH4CI：1.45、Na2SO4：14、CaCI2·2H2O： 0.55、MgSO4·7H2O：3.5、酵母膏：7.5、质量百分浓度比为60%的乳酸钠 溶液：14、葡萄糖：1.4、维生素C：4.5、蒸馏水：1950。
具体实施方式六：本实施方式的硫酸盐还原菌培养基由下列成分按重 量份数制备而成：K2HPO4：0.5、NH4CI：1、Na2SO4：10、CaCI2·2H2O：0.1、 MgSO4·7H2O：2.5、酵母膏：6、质量百分浓度比为60%的乳酸钠溶液： 10、葡萄糖：1、维生素C：3、蒸馏水：1000。
