申请日2007.01.18
公开(公告)日2007.09.12
IPC分类号C12N1/00; C02F3/30; C02F3/34
摘要
本发明涉及一种废水处理用复合高效微生物制剂的制备方法，该方法包括以下步骤：A.选育：B.兼氧及厌氧复合高效微生物制剂的发酵培养：C.好氧复合高效微生物制剂的发酵培养：D.混合;1.利用本发明的制备方法制备的复合高效微生物制剂无毒性，无致病性，不会造成二次污染;2.利用本发明的制备方法制备的复合高效微生物制剂微生物种类较多，降解废水中的污染物速度较快，能力强，处理效率高;可以彻底降解有机物和氨氮等污染因子;3.利用本发明的制备方法制备的复合高效微生物制剂用于处理废水产生污泥不仅产量较少，污泥龄较长，而且污泥沉降性好，紧密度高，稳定性好;4.本发明的制备方法工艺简单，选择灵活，所需设备较少，生产成本低;微生物一次性投加，无需补加;适合大规模生产的需求。
权利要求书
1、一种废水处理用复合高效微生物制剂的制备方法，该方法包括以下步 骤：
A：选育：收集微生物样品，制成稀释菌液，将稀释菌液通过平板划线进行 分离，在三角锥瓶中加入选育所用的培养基，接种入分离后得到的单菌株，然 后放入培养箱中，在25～30℃条件下培养5-15天;待菌种繁殖到1×106/ml 以上时，取20～40ml的菌培养液于培养皿中，加入化学诱变剂，通过化学诱 变5～20分钟，然后通过平板划线进行分离，在三角锥瓶中加入选育所用的培 养基，接种入分离后得到的单菌株，然后放入培养箱中，在25～30℃条件下 培养5-15天;待菌种繁殖到1×106/ml以上时，取10～30ml的菌培养液于培 养皿中，通过紫外诱变10～80秒，然后通过平板划线进行分离，在三角锥瓶 中加入选育所用的培养基，接种入分离后得到的单菌株，然后放入培养箱中， 在25～30℃条件下培养5-15天;将经过上述步骤的菌种培养物进行混合形成 混合菌群培养物;
B、兼氧及厌氧复合高效微生物制剂的发酵培养：在发酵罐中加入复合培 养基，取上述选育后混合菌群培养物接种到发酵罐中，在转速为10转/分～30 转/分的搅拌，温度为20～40℃，PH值为7.1～7.6条件下进行搅拌发酵培养 20～40天后，待发酵液菌数达到1×109/ml以上时，即得兼氧及厌氧复合高效 微生物制剂;
C、好氧复合高效微生物制剂的发酵培养：在发酵罐中加入复合培养基， 取上述选育后混合菌群培养物接种到发酵罐中，在温度为20～40℃，PH值为 7.1～7.6，每隔5～20分钟通入30秒～2分钟压力为0.1～0.5MPa得纯氧气 的条件下进行发酵培养10～20天后，待发酵液菌数达到1×109/ml以上时， 即得好氧复合高效微生物制剂;
D、混合：将上述制备的兼氧及厌氧复合高效微生物制剂和好氧复合高效 微生物制剂按照体积比为1～3∶1进行混合，混合后即得废水处理用复合高效 微生物制剂。
2、根据权利要求1所述的一种废水处理用复合高效微生物制剂的制备方 法，其特征在于：步骤A中选育所用的培养基为每1000克水中，葡萄糖0。 2g、牛肉膏0.75g;蛋白胨1.5g;氯化钠0.75g;尿素0.2g;磷酸钠0.1g;所述 的培养基的PH值7.0～7.5。
3、根据权利要求1或2所述的一种废水处理用复合高效微生物制剂的制 备方法，其特征在于：步骤A中所述的化学诱变剂为甲基磺酸乙酯、硫酸二乙 酯中的一种或两种，加入量为培养液的体积百分比的0.1%～0.5%。
4、根据权利要求1所述的一种废水处理用复合高效微生物制剂的制备方 法，其特征在于：步骤B中所述的复合培养基为每1000kg水中，牛肉膏5g; 蛋白胨15g;氯化钠0.75g;酵母浸出液13g;磷酸钠4.0g;蔗糖100g;葡萄 糖100g;尿素2g;甲醇0.2ml;苯酚0.02g;磷酸二氢钠0.1g;微量元素200～ 1000μg;所述的复合培养基的PH值7.0～7.5。
5、根据权利要求1所述的一种废水处理用复合高效微生物制剂的制备方 法，其特征在于：步骤B中发酵培养3～8天后还每天往发酵罐中还加入甲醛、 麦芽糖、淀粉、磷酸二氢钠、尿素、蛋白胨、微量元素。
6、根据权利要求1或4或5所述的一种废水处理用复合高效微生物制剂 的制备方法，其特征在于：步骤B中发酵培养20～40天后待发酵液菌数达到 1×109/ml以上时，还在发酵罐中加入活性炭、硅藻土和浓度为5～20%的亚 硫酸钠溶液。
7、根据权利要求1所述的一种废水处理用复合高效微生物制剂的制备方 法，其特征在于：步骤C中所述的复合培养基为每1000kg水中，牛肉膏5g; 蛋白胨15g;氯化钠0.75g;酵母浸出液13g;磷酸钠4.0g;蔗糖100g;葡萄 糖100g;尿素2g;甲醇0.2ml;苯酚0.02g;磷酸二氢钠0.1g;微量元素200～ 100μg;所述的培养基的PH值7.0～7.5。
8、根据权利要求1所述的一种废水处理用复合高效微生物制剂的制备方 法，其特征在于：步骤C中发酵培养2～5天后还每天往发酵罐中还加入甲醛、 麦芽糖、淀粉、磷酸二氢钠、尿素、蛋白胨。
9、根据权利要求1或7或8所述的一种废水处理用复合高效微生物制剂 的制备方法，其特征在于：步骤C中发酵培养10～20天后待发酵液菌数达到 1×109/ml以上时，还在发酵罐中加入活性炭、硅藻土和浓度为5～20%的亚 硫酸钠溶液。
说明书
一种废水处理用复合高效微生物制剂的制备方法
技术领域
本发明涉及一种微生物制剂的制备方法，尤其涉及一种废水处理用复合高 效微生物制剂的制备方法;属于环境保护领域。
背景技术
在人类社会的不断发展，生产力水平不断提高的同时，人类的生产和生活 对环境的污染也不断的加大。大量未达标的污水排入环境，加剧了水资源的短 缺。微生物处理技术是处理污水的最有效和最经济的方法。但现有微生物处理 系统业内主要是考虑工艺的优化如接触氧化法，UASB，氧化沟，生物滤池等， 而忽视了作为处理主体的微生物，在这些工艺中大部分用的是在自然条件下产 生的野生微生物。野生微生物活性不高，造成处理效率低下，停留时间长，剩 余污泥产量大。特别是在高浓度难降解污染因子(复杂有机物，氨氮等)的处 理中不尽人意。为了使微生物技术更好的服务于废水治理，现有的污水处理过 程常常采用现代生物技术培育了复合高效微生物制剂;如中国专利申请 (01139757.8)一种治理造纸废水的微生物制剂及培养方法：该方法基本上包 括;1)从环境中用各种专用培养基分离出：具有降解纤维功能的菌，具有降 解木质素功能的菌，具有降解半纤维素功能的菌，对分离筛选的各种高效菌株 进行驯化、培养;2)取一种或多种具有降解木质素、纤维素及半纤维素功能 的菌株分别培养，加工成液体或固体，将培养物按不同比例混合，制成复合微 生物。利用该方法制成的复合微生物较野生微生物活性有较大的提高，但是该 方法只是采用专用培养基对微生物进行驯化、培养;微生物的活性依然较低， 而且这种方法制成的微生物主要是降解木质素、纤维素类的微生物只能用于处 理造纸所产生的废水，对其他含有大量复杂有机物、氨氮的废水却没有处理功 能;因此对废水处理不彻底，无法满足大规模生产的需求;后来人们对多种微 生物进行培养，制成有多种微生物组成的复合制剂如中国专利申请 (01127096.9)一种复合微生物菌剂及其生产方法，该方法采用在培养基中殖 入主要有光合菌、乳酸菌、放线菌、发酵系的丝状菌等组成的复合微生物菌种， 经培养增殖而成复合微生物菌剂，该方法制成的复合微生物由于采用多种菌种 组合的方式对有机废水进行处理，但是该方法是采用普通的增殖培养的方法， 并没有激活微生物的活性，而且微生物种类相对单一，不能形成较完整的食物 链，因此无法达到较好的处理效果。
发明内容
本发明的目的在于提供一种废水处理用复合高效微生物制剂的制备方法。
本发明的解决方法是基于微生物对废水处理的认识及作用，参考现代生物 技术研究成就，从自然界或市场中采样野生微生物，按照现代微生物选育技术， 筛选和复配出能在废水处理中高效发挥作用的微生物菌群，然后通过大规模的 工业化扩配成为复合高效微生物制剂，该复合高效微生物制剂能彻底降解废水 中的有机物、氨、氮等污染因子，剩余污泥产量少，污泥沉降性好，紧密度高， 稳定性好。
本发明的上述技术问题是通过以下技术方案得以实施的：一种废水处理用 复合高效微生物制剂的制备方法，该方法包括以下步骤：
A：选育：收集微生物样品，制成稀释菌液，将稀释菌液通过平板划线进行 分离，在三角锥瓶中加入选育所用的培养基，接种入分离后得到的单菌株，然 后放入培养箱中，在25～30℃条件下培养5-15天;待菌种繁殖到1×106/ml 以上时，取20～40ml的菌培养液于培养皿中，加入化学诱变剂，通过化学诱 变5～20分钟，然后通过平板划线进行分离，在三角锥瓶中加入选育所用的培 养基，接种入分离后得到的单菌株，然后放入培养箱中，在25～30℃条件下 培养5-15天;待菌种繁殖到1×106/ml以上时，取10～30ml的菌培养液于培 养皿中，通过紫外诱变10～80秒，然后通过平板划线进行分离，在三角锥瓶 中加入选育所用的培养基，接种入分离后得到的单菌株，然后放入培养箱中， 在25～30℃条件下培养5-15天;将经过上述步骤的菌种培养物进行混合形成 混合菌群培养物;
B、兼氧及厌氧复合高效微生物制剂的发酵培养：在发酵罐中加入复合培 养基，取上述选育后混合菌群培养物接种到发酵罐中，在转速为10转/分～30 转/分的搅拌，温度为20～40℃，PH值为7.1～7.6条件下进行搅拌发酵培养 20～40天后，待发酵液菌数达到1×109/ml以上时，即得兼氧及厌氧复合高效 微生物制剂;
C、好氧复合高效微生物制剂的发酵培养：在发酵罐中加入复合培养基， 取上述选育后混合菌群培养物接种到发酵罐中，在温度为20～40℃，PH值为 7.1～7.6，每隔5～20分钟通入30秒～2分钟压力为0.1～0.5MPa得纯氧气 的条件下进行发酵培养10～20天后，待发酵液菌数达到1×109/ml以上时， 即得好氧复合高效微生物制剂;
D、混合：将上述制备的兼氧及厌氧复合高效微生物制剂和好氧复合高效 微生物制剂按照体积比为1～3∶1进行混合，混合后即得废水处理用复合高效 微生物制剂。
通过本发明的制备方法制成的复合高效微生物制剂主要有四十多个种属 微生物组成的复合微生物菌落，构成了较完整的微生物食物链。
主要的微生物种属如下所示：
动胶团属(Zoogloea)从毛单胞菌属(Comamonnas)产碱杆菌属 (Alcaligenes)微球菌属(Micrococcus)棒状杆菌属(Corynebacterium) 黄杆菌属(Flavobacterium)无色杆菌属(Achromobacter)芽孢杆菌属 (Bacillus)假单胞菌属(Pseudomonas)亚硝化单胞菌属(Nitrosomonas) 亚硝化球菌属(Nitrosococcus)亚硝化弧菌属(Nitrosovibrio)硝化杆菌 属(Nitrobacter)硝化球菌属(Nitrococcus)硝化螺菌属(Nitrospira)短 杆菌属(Brevibacterium)浮游球衣菌属(Sphaerotilus natans)微丝菌 属(Microthrix)大肠埃希氏菌属(Eschericchia coli)产气杆菌属 (Aerobacter)诺卡氏菌属(Nocardia)节杆菌属(Arthrobacter)螺菌 属(Spirillum)酵母菌属(Saccharomyces)红酵母属(Rhodo torula)梭 菌属(Clostridium)拟杆菌属(Bacteriodes)链霉菌属(Streptomyces) 丁酸弧菌属(Butyrivibrio)真细菌(Eubacterium)双歧杆菌属 (Bifidobacterium)奥氏甲烷杆菌(Methanomelidnskii)脱硫弧菌 (Desulfovibrio)亨氏甲烷螺菌(Methanospirillum hungatei)嗜热自 养甲烷杆菌(Methanobacterium thermoautotrophicum)硫还原菌属 (Desulfurella)硫杆菌属(Thiobacillus)脱硫杆菌属(Desulfobacterium) 脱氮副球菌属(Paracoccus denitrificans)色杆菌属(Chromobacter)脱 氮硫杆菌属(Thiobacillus denitrificans)红螺菌属(Rhodospirillum)
这些微生物的单一种属也可以应用其它方式制备而成或直接从市场上购 买取得;但是通过本发明的制备方法可以将这四十多个种属的微生物制成废水 处理用复合高效微生物制剂;这些复合高效微生物本身无毒性、无致病性、不 会造成二次污染;通过本发明的制备方法制成的复合高效微生物制剂去除废水 中的等量污染物的速度快，能力强比常规野生自发菌提高很多;通过本发明的 制备方法制成的复合高效微生物制剂能够形成完整的食物链，可以彻底降解有 机物和氨氮等污染因子，处理效率高，避免了常规野生自发菌菌种种类不全形 不成完整的食物链而造成有机物和氨氮等污染因子不能完全降解;通过本发明 的制备方法制成的复合高效微生物制剂具有菌种种类齐全、食物链完整，可以 把老化和死亡的微生物分解因而剩余污泥产量少，污泥沉降性好，紧密度高， 稳定性好。
本发明制成的复合高效微生物制剂可以看作是一座小型的化工厂，并且自 备酵素，将水中的有机物摄食后，经过连续的反应得到能量和细胞构成。而有 机物则分解成CO2，水及许多对环境水质没有影响的小分子，氨氮代谢为氮气。 利用复合高效微生物制剂不同的菌群，分解不同的污染物，使处理槽内的菌群 互相依赖而形成特殊的分解链。
在上述的废水处理用复合高效微生物制剂的制备方法中，在步骤A中选育 所用的培养基为每1000克水中，葡萄糖0.2g、牛肉膏0.75g;蛋白胨1.5g;氯 化钠0.75g;尿素0.2g;磷酸钠0.1g;所述的培养基的PH值7.0～7.5。本发明 步骤A中纯培养所用的培养基是通过以下方法进行配置的：按上述比例在 1000g水中加入各种成份搅拌混匀，然后放入高压灭菌锅内，在压力为 1.05kg/cm3;温度为121℃的条件下灭菌30分钟;灭菌后的培养基放入无菌 室冷却待用;本发明选育所用的培养基营养成分比较全面，营养丰富，微生物 增殖速率快。
在上述的废水处理用复合高效微生物制剂的制备方法中，在步骤A中所述 的化学诱变剂为甲基磺酸乙酯、硫酸二乙酯中的一种或两种，加入量为培养液 的体积百分比的0.1%～0.5%。通过加入化学诱变剂对微生物进行化学诱变， 提高微生物酶的产率及活性，提高微生物对污染物质的去初能力及效率。
在上述的废水处理用复合高效微生物制剂的制备方法中，在步骤B和步骤 C中所述的复合培养基为每1000kg水中，牛肉膏5g;蛋白胨15g;氯化钠0.75g; 酵母浸出液13g;磷酸钠4.0g;蔗糖100g;葡萄糖100g;尿素2g;甲醇0.2ml; 苯酚0.02g;磷酸二氢钠0.1g;微量元素200～1000μg;所述的培养基的PH 值7.0～7.5。本发明步骤B和步骤C中所用的复合培养基是通过以下方法进行 配置的：按上述比例在1000Kg水中加入各种成份搅拌混匀，然后放入高压灭 菌锅内，在压力为1.05kg/cm3;温度为121℃的条件下灭菌30分钟;灭菌后 的培养基放入无菌室冷却待用，其中所述的微量元素为铁、钴、镍、锰等元素。 本发明所用的复合培养基营养成分比较全面，营养丰富，微生物增殖速率快。
在上述的废水处理用复合高效微生物制剂的制备方法中，在步骤B中发酵 培养3～8天后还每天往发酵罐中还加入甲醛、麦芽糖、淀粉、磷酸二氢钠、 尿素、蛋白胨、微量元素。培养3-8天后，发酵罐中营养物质消耗觉多，随着 微生物的增殖，必须每天补充适当的营养，防止由于营养不够，造成微生物自 溶。
在上述的废水处理用复合高效微生物制剂的制备方法中，在步骤B中发酵 培养20～40天后待发酵液菌数达到1×109/ml以上时，停止培养，在发酵罐 中加入活性炭或硅藻土使成分散状态的菌吸附在活性炭或硅藻土，加入浓度为 5～20%的亚硫酸钠溶液使发酵液处于无氧状态，利于微生物制剂保存。
在上述的废水处理用复合高效微生物制剂的制备方法中，在步骤C中发酵 培养2～5天后还每天往发酵罐中还加入甲醛、麦芽糖、淀粉、磷酸二氢钠、 尿素、蛋白胨;加入这些物质补充了步骤C中复合培养基的的消耗，防止由于 营养不够，造成微生物自溶。
在上述的废水处理用复合高效微生物制剂的制备方法中，在步骤C发酵培 养10～20天后待发酵液菌数达到1×109/ml以上时停止培养，在发酵罐中加 入活性炭或硅藻土使成分散状态的菌吸附在活性炭或硅藻土，加入浓度为5～ 20%的亚硫酸钠溶液使发酵液处于无氧状态，利于微生物制剂保存。
综上所述：本发明废水处理用复合高效微生物制剂的制备方法具有以下优 点：
1、利用本发明的制备方法制备的复合高效微生物制剂无毒性，无致病性， 不会造成二次污染;
2、利用本发明的制备方法制备的复合高效微生物制剂微生物种类较多， 降解废水中的污染物速度较快，能力强，处理效率高;可以彻底降解有机物和 氨氮等污染因子;
3、利用本发明的制备方法制备的复合高效微生物制剂用于处理废水产生 污泥不仅产量较少，污泥龄较长，而且污泥沉降性好，紧密度高，稳定性好;
4、本发明的制备方法工艺简单，选择灵活，所需设备较少，生产成本低; 微生物一次性投加，无需补加;适合大规模生产的需求。
具体实施方式
下面通过实施例，对本发明的技术方案作进一步具体的说明;但不发明并 不限于这些实施例。
实施例：
一：选育
从众多不同水质运行良好的生物处理系统，包括厌氧、兼氧、好氧环境中 采集微生物样品;
采集后的微生物种属如下所示：
动胶团属(Zoogloea)从毛单胞菌属(Comamonnas)产碱杆菌属 (Alcaligenes)微球菌属(Micrococcus)棒状杆菌属(Corynebacterium) 黄杆菌属(Flavobacterium)无色杆菌属(Achromobacter)芽孢杆菌属 (Bacillus)假单胞菌属(Pseudomonas)亚硝化单胞菌属(Nitrosomonas) 亚硝化球菌属(Nitrosococcus)亚硝化弧菌属(Nitrosovibrio)硝化杆菌 属(Nitrobacter)硝化球菌属(Nitrococcus)硝化螺菌属(Nitrospira)短 杆菌属(Brevibacterium)浮游球衣菌属(Sphaerotilus natans)微丝菌 属(Microthrix)大肠埃希氏菌属(Eschericchia coli)产气杆菌属 (Aerobacter)诺卡氏菌属(Nocardia)节杆菌属(Arthrobacter)螺菌 属(Spirillum)酵母菌属(Saccharomyces)红酵母属(Rhodo torula)梭 菌属(Clostridium)拟杆菌属(Bacteriodes)链霉菌属(Streptomyces) 丁酸弧菌属(Butyrivibrio)真细菌(Eubacterium)双歧杆菌属 (Bifidobacterium)奥氏甲烷杆菌(Methanomelidnskii)脱硫弧菌 (Desulfovibrio)亨氏甲烷螺菌(Methanospirillum hungatei)嗜热自 养甲烷杆菌(Methanobacterium thermoautotrophicum)硫还原菌属 (Desulfurella)硫杆菌属(Thiobacillus)脱硫杆菌属(Desulfobacterium) 脱氮副球菌属(Paracoccus denitrificans)色杆菌属(Chromobacter)脱 氮硫杆菌属(Thiobacillus denitrificans)红螺菌属(Rhodospirillum)
将采集的微生物样品用稀释涂布平板法分离出单个微生物菌落。具体步骤 如下：把微生物样品放入装有100ml无菌水并带有玻璃珠的三角瓶中，振荡约 10min，使样品与水充分混匀，将细胞分散。用一支无菌吸管从中吸取1ml悬 液加入装有9ml无菌水的试管中，让菌液混匀，即成10-2稀释液;再换一支无 菌吸管吸取10-2稀释液1ml，移入装有9ml无菌水的试管中，即成10-3稀释液; 以此类推，连续稀释，制成10-1、10-2、10-3、10-4、10-5等一系列稀释菌液。然 后用无菌吸管按无菌操作要求依次吸取各种稀释液各1ml放入平板中，用无菌 玻璃涂棒将菌液在平板上涂抹均匀，放在4℃烘箱中倒置培养;
对每个单菌种进行种属和性质进行鉴定分类，采用杜邦Qualicon推出的 以DNA指纹为基础的RiboPrinter技术，通过系统数据库查对;
在500ml三角锥瓶中加入选育所用的培养基250ml，其中所述的培养基为 每1000克水中，葡萄糖0.2g、牛肉膏0.75g;蛋白胨1.5g;氯化钠0.75g; 尿素0.2g;磷酸钠0.1g;所述的培养基的PH值7.5;在无菌室中接种入分离 后得到的单菌株，用棉塞塞住三角锥瓶口，然后放入恒温培养箱中，在28℃ 条件下培养10天，待菌种繁殖到一定量后(达到1×106个菌数/ml)，取30ml 菌培养液于培养皿中，在其中加入浓度为0.2%(体积比)的甲基磺酸乙酯(EMS) 和0.1%(体积比)的硫酸二乙酯(DES)突变剂，诱导菌种突变10分钟，然后 通过上述的涂布平板法进行分离，挑出培养皿平板中生长情况最好的菌落;
通过化学诱变后分离出的性状强的菌种，在500ml三角锥瓶中加入选育所 用的培养基250ml，其中所述的培养基为每1000克水中，葡萄糖0.2g、牛肉 膏0.75g;蛋白胨1.5g;氯化钠0.75g;尿素0.2g;磷酸钠0.1g;所述的培养基 的PH值7.5;在无菌室中接种入分离后得到的单菌株，用棉塞塞住三角锥瓶 口，然后放入恒温培养箱中，在28℃条件下培养10天，待菌种繁殖到一定量 后(达到1×106个菌数/ml)，取15ml菌种培养液进行50秒的15W紫外灯的 照射诱变，然后再通过上述的涂布平板法进行分离，挑出培养皿平板中生长情 况最好的菌落，在500ml三角锥瓶中加入选育所用的培养基250ml，其中所述 的培养基为每1000克水中，葡萄糖0.2g、牛肉膏0.75g;蛋白胨1.5g;氯化 钠0.75g;尿素0.2g;磷酸钠0.1g;所述的培养基的PH值7.5;在无菌室中接 种入分离后得到的单菌株，用棉塞塞住三角锥瓶口，然后放入恒温培养箱中， 在28℃条件下培养10天后得到单一菌种的培养物。
按上述步骤得到的每一种单一菌种的培养物，并按1∶1的比例混合在一 起形成混合菌群培养物。
二：兼氧及厌氧复合高效微生物制剂的发酵培养
在2m3的发酵罐内加入1800L的灭菌后的复合培养基，其中所述的复合培 养基为每1000kg水中，牛肉膏5g;蛋白胨15g;氯化钠0.75g;酵母浸出液 13g;磷酸钠4.0g;蔗糖100g;葡萄糖100g;尿素2g;甲醇0.2ml;苯酚0.02g; 磷酸二氢钠0.1g;铁、钴、镍、锰元素微量各150微克;所述的复合培养基 的PH值7.5;再取上述方法得到的原始混合菌群培养物300ml接种到发酵罐 中，在20转/分搅拌条件下进行培养，发酵温度控制在30℃，pH控制在7.5。 发酵罐置于无菌室中。发酵培养第五天开始每天往发酵罐中加入600ml灭菌后 的CH3OH、500克麦芽糖、100克淀粉、3克NaH2PO4、2克尿素、2克蛋白胨、 铁、钴、镍、锰元素微量各15微克。发酵培养30天发酵液菌数达到109数量 级后结束，在发酵罐中加入1%(质量比)的活性炭，0.1%(质量比)硅藻土 和0.1%(体积比)的10%的亚硫酸钠溶液，即得到兼氧及厌氧复合高效微生物 制剂。
三：好氧复合高效微生物制剂的发酵培养
在2m3的发酵罐内加入1800L的灭菌后的复合培养基，其中所述的复合培 养基为每1000kg水中，牛肉膏5g;蛋白胨15g;氯化钠0.75g;酵母浸出液 13g;磷酸钠4.0g;蔗糖100g;葡萄糖100g;尿素2g;甲醇0.2ml;苯酚0.02g; 磷酸二氢钠0.1g;铁、钴、镍、锰元素微量各100微克;所述的培养基的PH 值7.5，再取上述方法得到的原始混合菌群培养物300ml接种到发酵罐中，发 酵温度控制在30℃，pH控制在7.5。发酵罐置于无菌室中，培养每隔10分钟 通入1分钟压力0.3MPa的纯氧气。发酵培养第3天开始每天往发酵罐中加入 600ml灭菌后的CH3OH、500克麦芽糖、100克淀粉、3克NaH2PO4、20克尿素、 2克蛋白胨。发酵培养15天发酵液菌数达到109数量级后结束，在发酵罐中加 入1%(质量比)的活性炭，0.1%(质量比)硅藻土和0.1%(体积比)的10% 的亚硫酸钠溶液，即得到好氧复合高效微生物制剂。
四：混合
将上述方法制得的兼氧及厌氧复合微生物制剂和上述方法制得的好氧微 生物制剂按照2∶1(体积比)进行混合及得到一种厌氧\兼氧\好氧复合的高效 微生物制剂。
