申请日2019.12.23
公开(公告)日2020.04.07
IPC分类号C12N1/36; C12N1/20; C02F3/34; C02F101/36; C12R1/38; C12R1/085; C12R1/01; C12R1/07
摘要
本发明涉及一种用于废水处理的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：制备步骤为：(1)原位系统菌群的增殖培养;(2)原位系统菌群的驯化筛选;(3)原位系统菌种的分离鉴定;(4)原位系统宏基因组鉴定及优势菌判定;(5)优势菌种的复配与扩大培养;(6)微生物菌剂的制成与保藏。本发明设计科学合理，分离筛选得到的原位系统优势微生物经扩大培养和复配后，对原位系统废水适应能力超强，微生物间共生关系和谐，生物处理效率高，对废水中的有机物降解性强，显示出高效、快速和实用等特点，大大提高工作的便捷性。本发明不仅可以应用于废水生物处理菌剂的制备，还可以推广到其他固体废弃物、废气及土壤的生物处理、生物修复菌剂的制备。
权利要求书
1.一种用于废水处理的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述制备方法的步骤为：
(1)原位系统菌群的增殖培养：配制增殖培养基并调节pH近中性，分装于250mL锥形瓶中，增殖好氧微生物时，每瓶装100mL;增殖兼氧微生物时，每瓶装200mL;将6～8%的废水或3～5%的相应污泥接入增殖培养基中，在30～35℃条件下，好氧微生物采用振荡培养，摇床转速110～160r/min，培养时间约20～30小时;兼氧微生物群采用静置培养，定时摇动，培养时间约20～30小时;
(2)原位系统菌群的驯化筛选：以不同浓度的废水作为碳源，根据废水特点调节C/N，适当添加无机盐配制成筛选培养基，分装于锥形瓶中，接入步骤(1)的菌种，培养方法同步骤(1);驯化从低到高逐步提高废水浓度，驯化时间72～80小时，最后在8000～10000r/15min条件下离心收集，得到驯化好的优势菌群;
(3)原位系统菌种的分离鉴定：将增值、筛选驯化得到的优势微生物菌群进行10-9～10-1梯度的稀释，取一定稀释浓度的悬浊液，进行平板涂布或划线，在30～35℃条件下培养，挑取单菌落并转接斜面再进行培养，对分离纯化出的菌种进行16s rDNA基因高通量测序鉴定;
(4)原位系统宏基因组鉴定及优势菌判定：取原位系统中的废水及污泥为样品，进行宏基因组鉴定，得到原位系统中主要微生物种类和分布占比关系，并以此为复配微生物菌剂的依据;
(5)优势菌种的复配与扩大培养：根据步骤(3)及(4)的鉴定结果，将分离纯化得到的主要菌种按占比关系进行复配，得到微生物菌剂的配方，再将这些主要菌种进行扩大培养，接种量为5～10%，装液率为70～75%，在30～35℃条件下，好氧微生物采用通风搅拌培养，通风比1:0.3～1;兼氧微生物采用静置培养，定时摇拌，培养时间约20～30小时;
(6)微生物菌剂的制成与保藏：将步骤(5)扩培的不同菌种的培养液按配方混合，再添加0.2～0.5%的吸附保护剂，混匀后制成菌剂，菌种的保藏是将培养得到的菌液离心收集，逐一做成冻干管长期保存，短期使用时将菌体在4℃条件下保藏，三个月内使用。
2.根据权利要求1所述的用于废水处理的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：步骤(1)中增殖培养基的成分为：蛋白胨8～12g/L、酵母粉4～6g/L、氯化钠8～12g/L，所述增值培养基的pH为7.0～7.2。
3.根据权利要求1所述的用于废水处理的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：步骤(2)中筛选培养基的成分为：废水、有机或无机含氮物、磷、钾、镁、钙、铁、硫、铜、锌、钴、锰、钼无机盐，所述筛选培养基的pH为7.0～7.2，所说筛选培养基经121℃、20min灭菌备用。
说明书
用于废水处理的复合微生物菌剂的制备方法
技术领域
本发明属于废水处理技术领域，涉及有效降解工业废水的特定复合微生物菌剂的培养方法，特别涉及一种用于废水处理的复合微生物菌剂的制备方法。
背景技术
工业废水大多属于成分复杂、有一定毒害性的难降解有机废水，但大多工业废水中都栖息生长着一定数量的特定优势微生物，这些微生物由于长期受到废水的驯化和筛选，共生关系和谐稳定，存活的都具有非常出色的适应能力和降解能力。通过一定的生物技术手段，增殖并分离得到这些特定的微生物菌群，按照特定环境样品中宏基因组的鉴定结果，将主要的微生物复配成菌剂，再利用这种特定的微生物菌剂强化工业废水的生物处理系统，是生物法处理工业废水的一条重要途径，具有很好的实用价值。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于废水处理的复合微生物菌剂的制备方法，该方法的菌种适应性更强，降解效果更显著，处理效率更高，使用更加便捷，对相关领域特定优势微生物的获得具有很好的借鉴和推广价值。
本发明解决其技术问题是通过以下技术方案实现的：
一种用于废水处理的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述制备方法的步骤为：
(1)原位系统菌群的增殖培养：配制增殖培养基并调节pH近中性，分装于 250mL锥形瓶中，增殖好氧微生物时，每瓶装100mL;增殖兼氧微生物时，每瓶装 200mL;将6～8%的废水或3～5%的相应污泥接入增殖培养基中，在30～35℃条件下，好氧微生物采用振荡培养，摇床转速110～160r/min，培养时间约20～30小时;兼氧微生物群采用静置培养，定时摇动，培养时间约20～30小时;
(2)原位系统菌群的驯化筛选：以不同浓度的废水作为碳源，根据废水特点调节C/N，适当添加无机盐配制成筛选培养基，分装于锥形瓶中，接入步骤(1)的菌种，培养方法同步骤(1);驯化从低到高逐步提高废水浓度，驯化时间72～80小时，最后在8000～10000r/15min条件下离心收集，得到驯化好的优势菌群;
(3)原位系统菌种的分离鉴定：将增值、筛选驯化得到的优势微生物菌群进行 10-9～10-1梯度的稀释，取一定稀释浓度的悬浊液，进行平板涂布或划线，在30～35℃条件下培养，挑取单菌落并转接斜面再进行培养，对分离纯化出的菌种进行16s rDNA 基因高通量测序鉴定;
(4)原位系统宏基因组鉴定及优势菌判定：取原位系统中的废水及污泥为样品，进行宏基因组鉴定，得到原位系统中主要微生物种类和分布占比关系，并以此为复配微生物菌剂的依据;
(5)优势菌种的复配与扩大培养：根据步骤(3)及(4)的鉴定结果，将分离纯化得到的主要菌种按占比关系进行复配，得到微生物菌剂的配方，再将这些主要菌种进行扩大培养，接种量为5～10%，装液率为70～75%，在30～35℃条件下，好氧微生物采用通风搅拌培养，通风比1:0.3～1;兼氧微生物采用静置培养，定时摇拌，培养时间约20～30小时;
(6)微生物菌剂的制成与保藏：将步骤(5)扩培的不同菌种的培养液按配方混合，再添加0.2～0.5%的吸附保护剂，混匀后制成菌剂，菌种的保藏是将培养得到的菌液离心收集，逐一做成冻干管长期保存，短期使用时将菌体在4℃条件下保藏，三个月内使用。
而且，步骤(1)中增殖培养基的成分为：蛋白胨8～12g/L、酵母粉4～6g/L、氯化钠8～12g/L，所述增值培养基的pH为7.0～7.2。
而且，步骤(2)中筛选培养基的成分为：废水、有机或无机含氮物、磷、钾、镁、钙、铁、硫、铜、锌、钴、锰、钼无机盐，所述筛选培养基的pH为7.0～7.2，所说筛选培养基经121℃、20min灭菌备用。
本发明的优点和有益效果为：
1、本发明用于废水处理的复合微生物菌剂的制备方法，与传统的分离、纯化、驯化方法相比，菌种适应性更强，降解效果更显著，处理效率更高，使用更加便捷，对相关领域特定优势微生物的获得具有很好的借鉴和推广价值。
2、本发明用于废水处理的复合微生物菌剂的制备方法，获得的优势微生物菌剂，强化特定微生物对工业废水有机物的降解性，大大提高了废水COD降解率。
3、本发明用于废水处理的复合微生物菌剂的制备方法，具有实用性强，简单、快速、高效的特点，适合推广应用。（发明人肖海燕;薛薇;黄华;朱敬华;王永乐;李蕊;夏冬）
