申请日2012.05.22
公开(公告)日2013.12.04
IPC分类号C02F3/34; C12N1/20; C12N1/14; C02F103/28; C12R1/645; C12R1/80; C12R1/07
摘要
本发明公开了降解造纸废水COD复合微生物活菌制剂及其制备方法和应用。该制剂含有斜卧青霉(Penicillium decumbens)，疣孢漆斑菌(Myrothecium Verrucaria)、马塞芽孢杆菌(Bacillus massiliensis)和固体发酵培养基。该制备方法包括以下步骤：(1)将经过斜面活化的斜卧青霉和疣孢漆斑菌分别接种于液体培养基中，25℃～30℃培养44～52小时，得微生物菌液;将经过斜面活化的马塞芽孢杆菌接种于液体培养基中，28～37℃培养40～52小时，得微生物菌液;(2)将微生物菌液均匀混合，并置于固体发酵培养基中以30℃发酵培养40-80小时，之后以40℃～60℃烘干，粉碎至15～50目，过筛即可。该制剂在造纸废水处理工艺中作为降解COD强化剂中的应用能够有效、迅速、高效降解造纸废水COD，改善污水色度与水质。
权利要求书
1.一种复合微生物活菌制剂，其特征在于，其含有斜卧青霉(Penicillium decumbens)，疣孢漆斑菌(Myrothecium Verrucaria)、马塞芽孢杆菌(Bacillus massiliensis)和固体发酵培养基。
2.如权利要求1所述的复合微生物活菌制剂，其特征在于，所述的斜 卧青霉菌(Penicillium decumbens)为斜卧青霉菌(Penicillium decumbens) CICC 40674、斜卧青霉菌(Penicillium decumbens)CICC 40361、斜卧青霉 菌(Penicillium decumbens)CGMCC3.3195和斜卧青霉菌(Penicillium decumbens)CGMCC3.524中的一种或多种;
所述的疣孢漆斑菌(Myrothecium Verrucaria)为疣孢漆斑菌 (Myrothecium Verrucaria)CGMCC3.2190、疣孢漆斑菌(Myrothecium Verrucaria)CGMCC 3.781和疣孢漆斑菌(Myrothecium Verrucaria) CCTCCAF93168中的一种或多种;
所述的马塞芽孢杆菌(Bacillus massiliensis)为马塞芽孢杆菌(Bacillus massiliensis)MCCC1 A00013。
3.如权利要求1所述的复合微生物活菌制剂，其特征在于，所述的斜 卧青霉菌(Penicillium decumbens)的用量为以菌数计占总菌数的百分比 20%～40%;所述的疣孢漆斑菌的用量为以菌数计占总菌数的百分比的 10%～35%;所述的马塞芽孢杆菌(Bacillus massiliensis)的用量为以菌数计 占总菌数的百分比30%～60%。
4.如权利要求1所述的复合微生物活菌制剂，其特征在于，所述的复 合微生物活菌制剂中，微生物的总菌数为10亿/克以上。
5.如权利要求1所述的复合微生物活菌制剂，其特征在于，所述的固 体发酵培养基的配方为：20%米粉、59%米糠、10%麸皮，10%豆粕，1% 微量元素，百分比是体积百分比，其中，所述的微量元素为硫酸镁10%， KCl 10%，水80%，百分比是重量体积百分比;所述的固体发酵培养基在使 用时灭菌后使用;所述的灭菌条件为121℃灭菌20-30分钟。
6.如权利要求1-5任一项所述的复合微生物活菌制剂的制备方法，其 特征在于，其包括以下步骤：
(1)将经过斜面活化的斜卧青霉(Penicillium decumbens)和疣孢漆斑 菌(Myrothecium Verrucaria)分别接种于液体培养基中，25℃～30℃培养44～52 小时，得微生物菌液;
将经过斜面活化的马塞芽孢杆菌(Bacillus massiliensis)接种于液体培 养基中，28～37℃培养40～52小时，得微生物菌液;
(2)将步骤(1)得到微生物菌液均匀混合，并置于固体发酵培养基中 以30℃发酵培养40-80小时，之后以40℃～60℃烘干，粉碎至15～50目，过 筛即可。
7.如权利要求6所述的复合微生物活菌制剂的制备方法，其特征在于， 所述的液体培养基培养的接种量为5%;所述的固体发酵培养基的用量为微 生物菌液1升加1.5公斤固体发酵培养基;
所述的斜卧青霉、疣孢漆斑菌和马塞芽孢杆菌的液体培养基配方为：大 豆粉1.5%，淀粉1%，酵母膏0.2%，葡萄糖1%，其余为水，pH 6.5，百分 比是重量体积百分比;
所述的马塞芽孢杆菌的液体培养基配方较佳的为：葡萄糖1%，麦芽粉 0.2%，酵母膏0.2%，乙酸钠0.5%，其余为水，pH 7.0，百分比是重量体积 百分比。
8.如权利要求1-5任一项所述的复合微生物活菌制剂在造纸废水处理 工艺中作为降解COD强化剂的应用。
9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的复合微生物活菌制 剂用于造纸废水处理工艺时，每立方米污水中复合微生物活菌制剂的用量为 0.1～50克，较佳的为0.4～20克。
10.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的复合微生物活菌制 剂用于造纸废水处理工艺时，将复合微生物活菌制剂和活性污泥联合使用; 其中，所述的复合微生物活菌制剂和活性污泥重量比为1∶1000～1∶10000， 较佳的为重量比1∶2000。
说明书
降解造纸废水COD复合微生物活菌制剂及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于微生物环保领域，特别涉及一种降解造纸废水COD复合微 生物活菌制剂及其制备方法和应用。
背景技术
造纸废水大致可分为：制浆蒸煮液、洗涤废水、漂白废水和纸机白水等。 碱法纸浆蒸煮废液，又称“黑液”，是制浆厂的主要污染源。制浆造纸废水 成分复杂，其组分不仅取决于纸浆的方法，也取决于所产品种和原料种类等 多种因素。废水中的悬浮物质主要来自制浆造纸各工序流失的纤维、填料等; BOD主要来源于制浆蒸煮工序，如纤维素分解生成的糖类、醇类、有机酸 等，在化学浆中，蒸煮废液的BOD5发生量占80%以上;COD和着色物质主 要来源于制浆蒸煮工序的木素及其衍生物。
制浆造纸废水的主要特点归纳如下：(1)污染物浓度高，尤其是制浆 生产线废水，含有大量的原料溶出物和化学添加剂，其BOD5浓度甚至高达 104mg/L以上;(2)难降解有机物成分多，可生化性差，木素、纤维素类 等物质采用活性污泥法难以降解，如有的纸厂处理过的废水BOD5已降至 10mg/L以下，但COD仍达200mg/L以上，色度还很高;(3)废水成分复 杂，除原料溶出物外，有的还含有硫化物、油墨、絮凝剂等;(4)废水流 量和负荷波动幅度大，并伴有纤维、化学品溢泄。在有多条生产线的工厂这 种现象更明显，水量和负荷波动对生化处理系统的稳定运行非常不利。
中国发明专利申请CN01139757.8，发明人李君文、古长庆等，公开一 种治理造纸废水的微生物制剂及培养方法，基本上包括：1)从环境中用各 种专用培养基分离出：具有降解纤维素功能的菌，具有降解木质素功能的菌， 具有降解半纤维素功能的菌，之后对分离筛选的各种高效菌株进行驯化、培 养。2)取一种或多种具有降解木质素、纤维素及半纤维素功能的菌株分别 培养，加工成液体或固体，然后根据造纸废水特点，将培养物按不同比例混 合，制成复合微生物;3)根据造纸废水的特点，调节曝气池中废水的碳∶ 氮∶磷为一定比例，再选取的微生物组合对废水进行处理。
中国发明专利申请CN200410034016.0，发明人郭林、王文惠等，公开 一种漆酶及其生产方法与专用生产菌株，其提供的菌株为血红密孔菌 (Pycnoporus sanguineus)mk528 CGMCC No.1124，获得漆酶的方法，包括 发酵培养血红密孔菌(Pycnoporus sanguineus)mk528 CGMCC No.1124和从 发酵培养基中提取漆酶。该专利申请的血红密孔菌(Pycnoporus sanguineus) mk528 CGMCC No.1124经发酵培养，得到的发酵液漆酶酶活高达63U/ml; 而且该菌株在培养过程中不产生木质素过氧化物酶和锰过氧化物酶，便于漆 酶的提取，使提取得到的漆酶可广泛应用于造纸废水处理和木材加工行业中 取代甲醛等化学药品。
但是，简单观察上述使用微生物菌种进行造纸废水处理的方法可知，上 述这些方法处理成本偏高，效率低，要么依赖于特定的菌种、要么需要对菌 种进行特别的驯化和培养，仍然制约着造纸废水处理问题。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服了现有技术中造纸污水处理技术存 在COD难以降解的问题，活性污泥法难以大幅度调整获得高效微生物，而 其他使用微生物菌种进行造纸废水处理的方法依赖于特定的菌种，或者需要 对菌种进行特别的驯化和培养，处理成本偏高，效率低等的缺陷，而提供了 一种能够有效、迅速、高效降解造纸废水COD，改善污水色度与水质的复 合微生物活菌制剂及其制备方法和应用。
本发明的复合微生物活菌制剂含有斜卧青霉(Penicillium decumbens)， 疣孢漆斑菌(Myrothecium Verrucaria)、马塞芽孢杆菌(Bacillus massiliensis) 和固体发酵培养基。
本发明中，所述的斜卧青霉菌属于青霉属的真菌，较佳的为斜卧青霉菌 (Penicillium decumbens)CICC 40674(可自中国工业微生物菌种保藏管理 中心购得)、斜卧青霉菌(Penicillium decumbens)CICC 40361(可自中国工 业微生物菌种保藏管理中心购得)、斜卧青霉菌(Penicillium decumbens) CGMCC3.3195(中国普通微生物菌种保藏管理中心)和斜卧青霉菌 (Penicillium decumbens)CGMCC3.524(中国普通微生物菌种保藏管理中心) 中的一种或多种。所述的斜卧青霉菌(Penicillium decumbens)的用量较佳 的为以菌数计占总菌数的百分比20%～40%。
本发明中，所述的疣孢漆斑菌属于真菌类别，较佳的为疣孢漆斑菌 (Myrothecium Verrucaria)CGMCC3.2190(中国普通微生物菌种保藏管理 中心)、疣孢漆斑菌(Myrothecium Verrucaria)CGMCC 3.781(中国普通微 生物菌种保藏管理中心)和疣孢漆斑菌(Myrothecium Verrucaria) CCTCCAF93168(中国典型培养物保藏中心)中的一种或多种。所述的疣孢 漆斑菌的用量较佳的为以菌数计占总菌数的百分比的10%～35%。
本发明中，所述的马塞芽孢杆菌是属于芽孢杆菌属细菌，较佳的为马塞 芽孢杆菌(Bacillus massiliensis)MCCC1A00013(可自中国海洋微生物菌种 保藏管理中心购得)。所述的马塞芽孢杆菌(Bacillus massiliensis)的用量较 佳的为以菌数计占总菌数的百分比30%～60%。
本发明的复合微生物活菌制剂含有的微生物之间存在良好的协同作用。 在该协同作用下，这些菌所分泌的多种酶类，如纤维素酶、半纤维素酶、木 聚糖酶、淀粉酶、果胶酶和木质酶等，可更有效地降解水中的碳源物质，同 时其所产生的多糖能使水中悬浮物絮凝，有效的改善了污水色度，有效分解 造纸废水中难以降解的纤维素、木质素等物质以及其他化学物质，消除臭味。
本发明所述菌种均可以从中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物 中心(CGMCC)、中国工业微生物菌种保藏管理中心(CICC)、中国典型培 养物保藏中心(CCTCC)以及中国海洋微生物菌种保藏管理中心(MCCC) 购买得到。
本发明的复合微生物活菌制剂中，所述的微生物的总菌数较佳的为10 亿/克以上。
本发明中，所述的固体发酵培养基为本领域常规使用，一般为各种固体 发酵所用的基质，如简单PDA常用培养基，包括米粉、米糠、麸皮、豆粕 和微量元素;较佳的配方为：20%米粉、59%米糠、10%麸皮，10%豆粕， 1%微量元素，百分比是体积百分比，其中，所述的微量元素为硫酸镁10%， KCl 10%，水80%，百分比是重量体积百分比。所述的固体发酵培养基在使 用时一般按照本领域常规灭菌后使用。所述的灭菌条件为本领域常规操作， 较佳的为121℃灭菌20-30分钟。
本发明还提供前述的复合微生物活菌制剂的制备方法，可以按本领域常 规方法进行，将斜卧青霉(Penicillium decumbens)，疣孢漆斑菌(Myrothecium Verrucaria)和马塞芽孢杆菌(Bacillus massiliensis)分别进行放大液体培养， 然后与固体发酵培养基均匀混合发酵，干燥，粉碎，即可。
本发明的复合微生物活菌制剂的制备方法较佳的包括以下步骤：
(1)将经过斜面活化的斜卧青霉(Penicillium decumbens)和疣孢漆斑 菌(Myrothecium Verrucaria)分别接种于液体培养基中，25℃～30℃培养44～52 小时，得微生物菌液;
将经过斜面活化的马塞芽孢杆菌(Bacillus massiliensis)接种于液体培 养基中，28～37℃培养40～52小时，得微生物菌液;
(2)将步骤(1)得到微生物菌液均匀混合，并置于固体发酵培养基中 以30℃发酵培养40-80小时，之后以40℃～60℃烘干，粉碎至15～50目，过 筛即可。
本发明中，上述微生物菌种的种类和用量均如前所述。
步骤(1)和(2)中，所述的液体培养基培养和固体发酵培养基培养的 操作按本领域常规操作，较佳的接种量为5%。其中，液体培养基和固体发 酵培养基可采用本领域常用配方。
其中，所述的斜卧青霉、疣孢漆斑菌和马塞芽孢杆菌的液体培养基配方 较佳的为：大豆粉1.5%，淀粉1%，酵母膏0.2%，葡萄糖1%，其余为水， pH 6.5，百分比是重量体积百分比。
所述的马塞芽孢杆菌的液体培养基配方更佳的为：葡萄糖1%，麦芽粉 0.2%，酵母膏0.2%，乙酸钠0.5%，其余为水，pH 7.0，百分比是重量体积 百分比。
其中，所述的固体发酵培养基的配方如前所述。所述的固体发酵培养基 的用量较佳的为微生物菌液1升加1.5公斤固体发酵培养基。
本发明还涉及本发明的复合微生物活菌制剂在造纸废水处理工艺中作 为降解COD强化剂中的应用。
本发明中，所述的造纸废水的指标一般为COD在200-3000mg/L范围内 造纸废水。
本发明中，所述的复合微生物活菌制剂用于造纸废水处理工艺时，每立 方米污水中复合微生物活菌制剂的用量较佳的为1～50克，更佳的为4～20克。
本发明中，所述的复合微生物活菌制剂用于造纸废水处理工艺时，较佳 的将本发明的复合微生物活菌制剂和活性污泥联合使用;其中，所述的复合 微生物活菌制剂和活性污泥重量比较佳的为1∶1000～1∶10000，更佳的为重 量比1∶2000。
本发明中，上述优选条件在符合本领域常识的基础上可任意组合，即得 本发明各较佳实例。
本发明除特别说明之外，所用的百分比都是质量百分比。
本发明所用的原料或试剂除特别说明之外，均市售可得。
本发明的积极进步效果在于：
本发明的复合微生物活菌制剂制备方便，成本低廉，可以应用于现有的 造纸污水处理工艺中，特别适合各造纸污水处理厂使用。在使用中，可以使 用现有的设备投放，极大强化降解COD活性，也可与活性污泥一起投放发 生协同作用，均显著改善污水色度与水质，高效降解、减排目标，具有重大 的经济意义和环保意义。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在 所述的实施例范围之中。
下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照 制造厂商所建议的条件。
下述实施例中，所用菌种全部从中国微生物菌种保藏管理委员会普通微 生物中心(CGMCC)、中国工业微生物菌种保藏管理中心(CICC)以及中 国海洋微生物菌种保藏管理中心(MCCC)购买得到。
实施例1
(1)分别进行放大培养：
斜卧青霉(Penicillium decumbens)CICC40674和疣孢漆斑菌 (Myrothecium Verrucaria)CGMCC3.2190经斜面活化后，按接种量5%分别 接液体培养基，液体培养基配方是：大豆粉1.5%，淀粉1%，酵母膏0.2%， 葡萄糖1%，其余为水，pH 6.5，百分比是重量体积百分比，25℃发酵52小 时。
马塞芽孢杆菌(Bacillus massiliensis)MCCC 1A00013经斜面活化后， 按接种量5%可以接液体培养基，该液体培养基配方是：葡萄糖1%，麦芽 粉0.2%，酵母膏0.2%，乙酸钠0.5%，其余为水，pH 7.0，百分比是重量体 积百分比，30℃培养52小时。
活菌计数(常规活菌稀释计数法，下同)，检测菌数，按照下述各种菌 的菌数占总菌数的百分比进行混合：斜卧青霉40%，疣孢漆斑菌30%，马塞 芽孢杆菌30%。活菌总数高于12亿/毫升发酵液。
(2)固体发酵罐中加入固体发酵培养基(20%米粉、米糠59%、麸皮 10%，豆粕10%，微量元素1%，百分比是体积百分比;所述的微量元素为 硫酸镁10%，KCl 10%，水80%，百分比是重量体积百分比)。121℃灭菌 30分钟，待罐温降至40℃以下，在发酵罐旋转的情况下喷入混合菌液(按 照1升发酵液加1.5公斤固体发酵培养基)，30℃固体发酵40小时，40℃烘 干，粉碎，经20目过筛，备用。
活菌计数，总菌数达到10亿/克以上，包装装袋。
实施例2
(1)分别进行放大培养：
斜卧青霉(Penicillium decumbens)CGMCC3.3195、斜卧青霉(Penicillium decumbens)CGMCC3.524和疣孢漆斑菌(Myrothecium Verrucaria)疣孢漆 斑菌(Myrothecium Verrucaria)CGMCC3.2190、疣孢漆斑菌(Myrothecium Verrucaria)CCTCCAF93168经斜面活化后，按接种量5%分别接液体培养 基，液体培养基配方是：大豆粉1.5%，淀粉1%，酵母膏0.2%，葡萄糖1%， 其余为水，pH 6.5，百分比是重量体积百分比，25℃发酵44小时。
马塞芽孢杆菌(Bacillus massiliensis)MCCC 1A00013经斜面活化后， 按接种量5%可以接液体培养基，该液体培养基配方是：葡萄糖1%，麦芽 粉0.2%，酵母膏0.2%，乙酸钠0.5%，其余为水，pH 7.0，百分比是重量体 积百分比，37℃培养45小时。
活菌计数，检测菌数，按照下述各种菌的菌数占总菌数的百分比进行混 合：斜卧青霉20%，疣孢漆斑菌35%，马塞芽孢杆菌45%。活菌总数高于 12亿/毫升发酵液。
(2)固体发酵罐中加入固体发酵培养基(20%米粉、米糠59%、麸皮 10%，豆粕10%，微量元素1%，百分比是体积百分比;所述的微量元素为 硫酸镁10%，KCl 10%，水80%，百分比是重量体积百分比)。121℃灭菌 30分钟，待罐温降至40℃以下，在发酵罐旋转的情况下喷入混合菌液(按 照1升发酵液加1.5公斤固体发酵培养基)，30℃固体发酵40小时，50℃烘 干，粉碎，经20目过筛，备用。
活菌计数，总菌数达到10亿/克以上，包装装袋。
实施例3
斜卧青霉(Penicillium decumbens)CICC40674、斜卧青霉(Penicillium decumbens)CICC40361、斜卧青霉(Penicillium decumbens)CGMCC3.3195、 斜卧青霉(Penicillium decumbens)CGMCC3.524和疣孢漆斑菌(Myrothecium Verrucaria)CGMCC3.2190、疣孢漆斑菌(Myrothecium Verrucaria) CGMCC3.781、疣孢漆斑菌(Myrothecium Verrucaria)CCTCCAF93168经斜 面活化后，按接种量5%分别接液体培养基，液体培养基配方是：大豆粉 1.5%，淀粉1%，酵母膏0.2%，葡萄糖1%，其余为水，pH 6.5，百分比是 重量体积百分比，25℃发酵42小时。
马塞芽孢杆菌(Bacillus massiliensis)MCCC 1A00013经斜面活化后， 按接种量5%可以接液体培养基，该液体培养基配方是：葡萄糖1%，麦芽 粉0.2%，酵母膏0.2%，乙酸钠0.5%，其余为水，pH 7.0，百分比是重量体 积百分比，37℃培养52小时。
活菌计数，检测菌数，按照下述各种菌的菌数占总菌数的百分比进行混 合：斜卧青霉30%，疣孢漆斑菌10%，马塞芽孢杆菌60%。活菌总数高于 12亿/毫升发酵液。
(2)固体发酵罐中加入固体发酵培养基(20%米粉、米糠59%、麸皮 10%，豆粕10%，微量元素1%，百分比是体积百分比;所述的微量元素为 硫酸镁10%，KCl 10%，水80%，百分比是重量体积百分比)。121℃灭菌 30分钟，待罐温降至40℃以下，在发酵罐旋转的情况下喷入混合菌液(按 照1升发酵液加1.5公斤固体发酵培养基)，30℃固体发酵40小时，60℃烘 干，粉碎，经50目过筛，备用。
活菌计数，总菌数达到10亿/克以上，包装装袋。
实施例4
(1)分别进行放大培养：
斜卧青霉(Penicillium decumbens)CICC40674、斜卧青霉(Penicillium decumbens)CICC40361和疣孢漆斑菌(Myrothecium Verrucaria) CGMCC3.781、疣孢漆斑菌(Myrothecium Verrucaria)CCTCCAF93168经斜 面活化后，按接种量5%分别接液体培养基，液体培养基配方是：大豆粉 1.5%，淀粉1%，酵母膏0.2%，葡萄糖1%，其余为水，pH 6.5，百分比是 重量体积百分比，25℃发酵52小时。
马塞芽孢杆菌(Bacillus massiliensis)MCCC 1A00013经斜面活化后， 按接种量5%可以接液体培养基，该液体培养基配方是：葡萄糖1%，麦芽 粉0.2%，酵母膏0.2%，乙酸钠0.5%，其余为水，pH 7.0，百分比是重量体 积百分比，37℃培养40小时。
活菌计数，检测菌数，按照下述各种菌的菌数占总菌数的百分比进行混 合：斜卧青霉20%，疣孢漆斑菌20%，马塞芽孢杆菌60%。活菌总数高于 12亿/毫升发酵液。
(2)固体发酵罐中加入固体发酵培养基(20%米粉、米糠59%、麸皮 10%，豆粕10%，微量元素1%，百分比是体积百分比;所述的微量元素为 硫酸镁10%，KCl 10%，水80%，百分比是重量体积百分比)。121℃灭菌 30分钟，待罐温降至40℃以下，在发酵罐旋转的情况下喷入混合菌液(按 照1升发酵液加1.5公斤固体发酵培养基)，30℃固体发酵40小时，50℃烘 干，粉碎，经30目过筛，备用。
活菌计数，总菌数达到10亿/克以上，包装装袋。
对比例1
(1)分别进行放大培养：
斜卧青霉(Penicillium decumbens)CICC40674、斜卧青霉(Penicillium decumbens)CICC40361和疣孢漆斑菌(Myrothecium Verrucaria) CGMCC3.781、疣孢漆斑菌(Myrothecium Verrucaria)CCTCCAF93168经斜 面活化后，按接种量5%分别接液体培养基，液体培养基配方是：大豆粉 1.5%，淀粉1%，酵母膏0.2%，葡萄糖1%，其余为水，pH 6.5，百分比是 重量体积百分比，25℃发酵52小时。
马塞芽孢杆菌(Bacillus massiliensis)MCCC 1A00013经斜面活化后， 按接种量5%可以接液体培养基，该液体培养基配方是：葡萄糖1%，麦芽 粉0.2%，酵母膏0.2%，乙酸钠0.5%，其余为水，pH 7.0，百分比是重量体 积百分比，37℃培养40小时。
活菌计数，检测菌数，单菌发酵液分别单独制备，制成单菌制剂。
活菌总数高于12亿/毫升发酵液。
(2)固体发酵罐中加入固体发酵培养基(20%米粉、米糠59%、麸皮 10%，豆粕10%，微量元素1%，百分比是体积百分比;所述的微量元素为 硫酸镁10%，KCl 10%，水80%，百分比是重量体积百分比)。121℃灭菌 30分钟，待罐温降至40℃以下，在发酵罐旋转的情况下喷入混合菌液(按 照1升发酵液加1.5公斤固体发酵培养基)，30℃固体发酵40小时，50℃烘 干，粉碎，经30目过筛，备用。
